中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2011年
11期
979-982
,共4页
李晓航%张佳林%康铁利%李乐%程颖%石蕊%赵宁%刘永锋
李曉航%張佳林%康鐵利%李樂%程穎%石蕊%趙寧%劉永鋒
리효항%장가림%강철리%리악%정영%석예%조저%류영봉
永生化%猿猴病毒大T抗原基因%Cre/LoxP位点特异性重组酶系统
永生化%猿猴病毒大T抗原基因%Cre/LoxP位點特異性重組酶繫統
영생화%원후병독대T항원기인%Cre/LoxP위점특이성중조매계통
目的 探索可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞的建立方法.方法 采用胰酶消化法分离培养大鼠皮肤成纤维细胞;逆转录病毒载体( SSR69)转染成纤维细胞,筛选稳定表达SV40 LTag的永生化成纤维细胞;用表达Cre重组酶的腺病毒感染永生化成纤维细胞,筛选获得回复后成纤维细胞.对原代、永生化及回复后成纤维细胞,倒置显微镜下观察细胞生长状态;采用细胞生长曲线法测定细胞增殖能力.免疫荧光染色检测Vimentin在原代及永生化成纤维细胞中的表达情况,平板克隆实验评价回复后成纤维细胞的致瘤性.结果 提取了大鼠皮肤成纤维细胞,并筛选出表达SV40 LTag的永生化成纤维细胞,二者形态无明显差异,均贴壁生长,呈长梭形或多角形,但永生化成纤维细胞体外增殖能力明显高于原代成纤维细胞(P＜0.05),在体外培养传代＞25代.细胞免疫荧光提示两种细胞均在细胞质内表达Vimentin.回复后成纤维细胞不表达SV40 LTag,其体外增殖能力与原代细胞无明显差异(P＞0.05),无致瘤性.结论 应用Cre/LoxP系统联合SV40 LTag可以建立可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞系.
目的 探索可複性永生化大鼠皮膚成纖維細胞的建立方法.方法 採用胰酶消化法分離培養大鼠皮膚成纖維細胞;逆轉錄病毒載體( SSR69)轉染成纖維細胞,篩選穩定錶達SV40 LTag的永生化成纖維細胞;用錶達Cre重組酶的腺病毒感染永生化成纖維細胞,篩選穫得迴複後成纖維細胞.對原代、永生化及迴複後成纖維細胞,倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態;採用細胞生長麯線法測定細胞增殖能力.免疫熒光染色檢測Vimentin在原代及永生化成纖維細胞中的錶達情況,平闆剋隆實驗評價迴複後成纖維細胞的緻瘤性.結果 提取瞭大鼠皮膚成纖維細胞,併篩選齣錶達SV40 LTag的永生化成纖維細胞,二者形態無明顯差異,均貼壁生長,呈長梭形或多角形,但永生化成纖維細胞體外增殖能力明顯高于原代成纖維細胞(P＜0.05),在體外培養傳代＞25代.細胞免疫熒光提示兩種細胞均在細胞質內錶達Vimentin.迴複後成纖維細胞不錶達SV40 LTag,其體外增殖能力與原代細胞無明顯差異(P＞0.05),無緻瘤性.結論 應用Cre/LoxP繫統聯閤SV40 LTag可以建立可複性永生化大鼠皮膚成纖維細胞繫.
목적 탐색가복성영생화대서피부성섬유세포적건립방법.방법 채용이매소화법분리배양대서피부성섬유세포;역전록병독재체( SSR69)전염성섬유세포,사선은정표체SV40 LTag적영생화성섬유세포;용표체Cre중조매적선병독감염영생화성섬유세포,사선획득회복후성섬유세포.대원대、영생화급회복후성섬유세포,도치현미경하관찰세포생장상태;채용세포생장곡선법측정세포증식능력.면역형광염색검측Vimentin재원대급영생화성섬유세포중적표체정황,평판극륭실험평개회복후성섬유세포적치류성.결과 제취료대서피부성섬유세포,병사선출표체SV40 LTag적영생화성섬유세포,이자형태무명현차이,균첩벽생장,정장사형혹다각형,단영생화성섬유세포체외증식능력명현고우원대성섬유세포(P＜0.05),재체외배양전대＞25대.세포면역형광제시량충세포균재세포질내표체Vimentin.회복후성섬유세포불표체SV40 LTag,기체외증식능력여원대세포무명현차이(P＞0.05),무치류성.결론 응용Cre/LoxP계통연합SV40 LTag가이건립가복성영생화대서피부성섬유세포계.
