CAJ | 학술논문

目的比较RNeasy mini kit (Qiagen)柱子法和Trizol法提取RNA在雪貂肺和肠组织H3N2 SYBR Green PCR定量中的去干扰作用,从而找到适合该定量体系的RNA提取方法.方法比较Trizol法,RNeasy mini kit柱子法,改良RNeasy mini kit柱子法1和改良RNeasy mini kit柱子法2提取肺肠组织RNA的质量,RNA逆转录成cDNA后,利用SYBR Green PCR方法检测样品中H3N2的载量,比较产物的特异性,综合评价RNA提取方法.结果 4种方法提取的肺和肠组织的RNA质量不相同,紫外分光光度仪测得RNeasy mini kit柱子法提取的RNA 的A260/280低于1.8,其余3种方法的A260/280在1.8～2.1之间,A260/230只有Trizol法能达到2.0左右,其余3种方法均远低于2.0.电泳可见Trizol法提取的RNA有3条带:28 s、18 s和5 s,而RNeasy mini kit柱子法的RNA除了有28 s、18 s外,还有基因组DNA,改良RNeasy mini kit柱子法1和2提取的RNA只有28 s和18s带.RNA逆转录后进行荧光定量PCR,从溶解曲线看,不论是鼻甲刮取物还是肺肠组织的样品模板,4种方法获得的样品与标准品均为单一峰溶解曲线峰,并且波峰位置重叠.而鼻甲刮取物定量的产物跑琼脂糖凝胶电泳均为单一的特异性条带,而肺肠组织的产物电泳发现:Trizol法获得的模板定量产物与标准品一致,为单一的特异性条带,而其它3种方法获得的模板则均有非特异性条带.结论鼻甲刮取物的病毒定量选用RNeasy mini kit柱子法提取定量结果与Trizol法一样可靠,说明对于简单样品该体系及引物非常适用,结果可信.对于组织样品肺和肠,Trizol法获得的样品定量结果比其它3种方法可靠.
목적 비교RNeasy mini kit (Qiagen)주자법화Trizol법제취RNA재설초폐화장조직H3N2 SYBR Green PCR정량중적거간우작용,종이조도괄합해정량체계적RNA제취방법.방법 비교Trizol법,RNeasy mini kit주자법,개량RNeasy mini kit주자법1화개량RNeasy mini kit주자법2제취폐장조직RNA적질량,RNA역전록성cDNA후,이용SYBR Green PCR방법검측양품중H3N2적재량,비교산물적특이성,종합평개RNA제취방법.결과 4충방법제취적폐화장조직적RNA질량불상동,자외분광광도의측득RNeasy mini kit주자법제취적RNA 적A260/280저우1.8,기여3충방법적A260/280재1.8～2.1지간,A260/230지유Trizol법능체도2.0좌우,기여3충방법균원저우2.0.전영가견Trizol법제취적RNA유3조대:28 s、18 s화5 s,이RNeasy mini kit주자법적RNA제료유28 s、18 s외,환유기인조DNA,개량RNeasy mini kit주자법1화2제취적RNA지유28 s화18s대.RNA역전록후진행형광정량PCR,종용해곡선간,불론시비갑괄취물환시폐장조직적양품모판,4충방법획득적양품여표준품균위단일봉용해곡선봉,병차파봉위치중첩.이비갑괄취물정량적산물포경지당응효전영균위단일적특이성조대,이폐장조직적산물전영발현:Trizol법획득적모판정양산물여표준품일치,위단일적특이성조대,이기타3충방법획득적모판칙균유비특이성조대.결론 비갑괄취물적병독정량선용RNeasy mini kit주자법제취정량결과여Trizol법일양가고,설명대우간단양품해체계급인물비상괄용,결과가신.대우조직양품폐화장,Trizol법획득적양품정량결과비기타3충방법가고.