CAJ | 학술논문

目的:对1例Ⅰ型抗凝血酶(AT)缺陷症患者及其家系进行表型诊断、基因分析及分子发病机制研究.方法:常规筛查检测AT缺陷症患者及其家系人员的凝血功能,采用血栓弹力图评估其高凝状态,用ELISA法检测抗心磷脂抗体(ACA)、抗β2GPI抗体,稀释的蝰蛇毒法检测狼疮抗凝物质(LA),发色底物法检测抗凝血酶(AT∶A)和蛋白C活性(PC∶A),凝固法检测蛋白5活性(PS∶A),荧光偏振免疫法测定同型半胱氨酸(Hcy),免疫比浊法定量检测抗凝血酶抗原(AT∶Ag),蛋白印迹分析血浆中AT的含量及相对分子质量,PCR法扩增AT基因的全部外显子及侧翼序列,DNA直接测序法进行基因分析.针对新的非经典剪接位点突变,提取患者的RNA,通过反转录反应结合巢式PCR扩增法,检测患者外周血中的AT异位转录本.结果:先证者的凝血筛查指标均正常,血栓弹力图指标显示其存在高凝状态,ACA、抗β2GPI抗体、LA、PC∶A、PS∶A及Hcy检测均正常；而其AT∶A和AT∶Ag同等下降,分别为45％和145 mg/L.血浆蛋白印迹检测结果显示,先证者血浆AT含量较正常混合血浆减少,但相对分子质量正常；基因分析发现,在5号内含子3’端剪接位点发生了杂合突变(g.13776_ 13777insAGGT)；巢式PCR产物直接测序检测到异位转录本,TA克隆分析发现,异常转录本与正常转录本的比例为1∶5.结论:剪接位点突变g.13776_13777insAGGT可导致AT基因异常转录,影响AT蛋白正常表达,导致该家系发生Ⅰ型遗传性AT缺陷症,此剪接位点突变为国际首次报道.
목적:대1례Ⅰ형항응혈매(AT)결함증환자급기가계진행표형진단、기인분석급분자발병궤제연구.방법:상규사사검측AT결함증환자급기가계인원적응혈공능,채용혈전탄력도평고기고응상태,용ELISA법검측항심린지항체(ACA)、항β2GPI항체,희석적호사독법검측랑창항응물질(LA),발색저물법검측항응혈매(AT∶A)화단백C활성(PC∶A),응고법검측단백5활성(PS∶A),형광편진면역법측정동형반광안산(Hcy),면역비탁법정량검측항응혈매항원(AT∶Ag),단백인적분석혈장중AT적함량급상대분자질량,PCR법확증AT기인적전부외현자급측익서렬,DNA직접측서법진행기인분석.침대신적비경전전접위점돌변,제취환자적RNA,통과반전록반응결합소식PCR확증법,검측환자외주혈중적AT이위전록본.결과:선증자적응혈사사지표균정상,혈전탄력도지표현시기존재고응상태,ACA、항β2GPI항체、LA、PC∶A、PS∶A급Hcy검측균정상；이기AT∶A화AT∶Ag동등하강,분별위45％화145 mg/L.혈장단백인적검측결과현시,선증자혈장AT함량교정상혼합혈장감소,단상대분자질량정상；기인분석발현,재5호내함자3’단전접위점발생료잡합돌변(g.13776_ 13777insAGGT)；소식PCR산물직접측서검측도이위전록본,TA극륭분석발현,이상전록본여정상전록본적비례위1∶5.결론:전접위점돌변g.13776_13777insAGGT가도치AT기인이상전록,영향AT단백정상표체,도치해가계발생Ⅰ형유전성AT결함증,차전접위점돌변위국제수차보도.