广东农业科学
廣東農業科學
엄동농업과학
GUANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
12期
151-153,174
,共4页
何永吉%卢晓霞%梁雅丽%潘薇薇%赵峰梅%赵邑
何永吉%盧曉霞%樑雅麗%潘薇薇%趙峰梅%趙邑
하영길%로효하%량아려%반미미%조봉매%조읍
Pyk2%激酶区蛋白%杆状病毒%表达
Pyk2%激酶區蛋白%桿狀病毒%錶達
Pyk2%격매구단백%간상병독%표체
采用PT-PCR扩增Pyk2-kinase基因,定向克隆至转移载体pFastBac HTB,转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细菌DH1OBac中,转座后利用抗性及蓝白斑筛选阳忭克隆获得重组Bacmid/Pyk2-kinase；提取重组杆粒.PCR法鉴定后转染昆虫细胞Sf9包装重组杆状病毒；利用病毒感染Sf9细胞进行蛋白表达,通过间接免疫荧光(1FA)、SDS-PAGE和Western blot检测表达情况.最终获得了重组杆状病毒rBac-Pyk2-kinase,实现了Pyk 2-k inase在Sf9细胞中的重组表达,其相对分子质量为32 ku,1FA、SDS-PAGE和Western blot检测结果与预期一致.
採用PT-PCR擴增Pyk2-kinase基因,定嚮剋隆至轉移載體pFastBac HTB,轉化到含穿梭載體Bacmid的感受態細菌DH1OBac中,轉座後利用抗性及藍白斑篩選暘忭剋隆穫得重組Bacmid/Pyk2-kinase；提取重組桿粒.PCR法鑒定後轉染昆蟲細胞Sf9包裝重組桿狀病毒；利用病毒感染Sf9細胞進行蛋白錶達,通過間接免疫熒光(1FA)、SDS-PAGE和Western blot檢測錶達情況.最終穫得瞭重組桿狀病毒rBac-Pyk2-kinase,實現瞭Pyk 2-k inase在Sf9細胞中的重組錶達,其相對分子質量為32 ku,1FA、SDS-PAGE和Western blot檢測結果與預期一緻.
채용PT-PCR확증Pyk2-kinase기인,정향극륭지전이재체pFastBac HTB,전화도함천사재체Bacmid적감수태세균DH1OBac중,전좌후이용항성급람백반사선양변극륭획득중조Bacmid/Pyk2-kinase；제취중조간립.PCR법감정후전염곤충세포Sf9포장중조간상병독；이용병독감염Sf9세포진행단백표체,통과간접면역형광(1FA)、SDS-PAGE화Western blot검측표체정황.최종획득료중조간상병독rBac-Pyk2-kinase,실현료Pyk 2-k inase재Sf9세포중적중조표체,기상대분자질량위32 ku,1FA、SDS-PAGE화Western blot검측결과여예기일치.
