CAJ | 학술논문

目的探讨kinectin蛋白在真核细胞的定位,并建立kinectin抗体免疫荧光检测方法(IFA).方法从人喉癌上皮细胞(HepG2)抽提RNA,用逆转录聚合酶链反应扩增kinectin编码区序列,并连接到真核表达载体pEGFP-C2中;将构建的pEGFP-kinectin载体导入HepG2细胞中,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的荧光及其细胞定位.然后,用此转染细胞制成的底片,建立检测kinectin抗体的IFA.同时用IFA对51名正常人及46例白塞病(BD)患者血清进行初步检测.结果经EcoRI单酶切和测序证实,成功地构建了表达kinectin的真核表达载体; pEGFP-kinectin载体转染的细胞经3次克隆筛选后,100%的细胞胞浆内发出特征性荧光.用kinectin抗体阳性血清染色,也得到类似特征的荧光.IFA检测显示,BD患者kinectin抗体的阳性率为32.7%(15/46),正常人均为阴性.结论构建kinectin表达的载体可在HepG2细胞中进行表达,并成功地用pEGFP-kinectin转染的HepG2细胞建立了检测kinectin抗体的IFA.
목적탐토kinectin단백재진핵세포적정위,병건립kinectin항체면역형광검측방법(IFA).방법종인후암상피세포(HepG2)추제RNA,용역전록취합매련반응확증kinectin편마구서렬,병련접도진핵표체재체pEGFP-C2중;장구건적pEGFP-kinectin재체도입HepG2세포중,재형광현미경하관찰록색형광단백(GFP)적형광급기세포정위.연후,용차전염세포제성적저편,건립검측kinectin항체적IFA.동시용IFA대51명정상인급46례백새병(BD)환자혈청진행초보검측.결과경EcoRI단매절화측서증실,성공지구건료표체kinectin적진핵표체재체; pEGFP-kinectin재체전염적세포경3차극륭사선후,100%적세포포장내발출특정성형광.용kinectin항체양성혈청염색,야득도유사특정적형광.IFA검측현시,BD환자kinectin항체적양성솔위32.7%(15/46),정상인균위음성.결론구건kinectin표체적재체가재HepG2세포중진행표체,병성공지용pEGFP-kinectin전염적HepG2세포건립료검측kinectin항체적IFA.