世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2004年
2期
271-275
,共5页
邢金良%杨向民%张思河%姚西英%梁瑞安%陈志南
邢金良%楊嚮民%張思河%姚西英%樑瑞安%陳誌南
형금량%양향민%장사하%요서영%량서안%진지남
目的:构建一个在大肠杆菌中表达人鼠嵌合Fab抗体的通用载体,并用于抗人肝癌相关抗原HAb18G人鼠嵌合Fab抗体的表达.方法:利用特异引物PCR扩增人IgG3的CHl和Ck基因,分别克隆到表达载体pComb3中,从而构建成人-鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体pComb3C.然后将扩增的mAbHAbl8的VL和VH基因分别组装到通用表达载体中,酶切去除gⅢ片段后,连接成为HAb18嵌合Fab抗体的分泌型表达载体pComb3C/cFab.转化大肠杆菌后诱导其表达,通过ELISA检测产物的表达和定位.最后,利用亲合层析纯化表达产物,进行SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,同时采用ELISA和免疫荧光法检测表达产物的亲和力和特异性.结果:测序及酶切鉴定表明,人IgG3的CHi和Ck基因正确插入到pComb3中,大小分别为324bp和333 bp,同时mAb HAb18的嵌合Fab基因也分别获得正确组装和表达.表达产物的分子质量约为45 ku,主要位于周质腔中.另外,ELISA和免疫荧光检测证实,表达产物含有人的抗体片段,并具有与相应抗原特异结合的活性,亲和力约为亲本抗体的10%.结论:成功构建了人鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体并制备了抗人肝癌小分子嵌合Fab抗体,为其进一步在肝癌诊断与治疗中的应用奠定了基础.
目的:構建一箇在大腸桿菌中錶達人鼠嵌閤Fab抗體的通用載體,併用于抗人肝癌相關抗原HAb18G人鼠嵌閤Fab抗體的錶達.方法:利用特異引物PCR擴增人IgG3的CHl和Ck基因,分彆剋隆到錶達載體pComb3中,從而構建成人-鼠嵌閤Fab抗體的通用錶達載體pComb3C.然後將擴增的mAbHAbl8的VL和VH基因分彆組裝到通用錶達載體中,酶切去除gⅢ片段後,連接成為HAb18嵌閤Fab抗體的分泌型錶達載體pComb3C/cFab.轉化大腸桿菌後誘導其錶達,通過ELISA檢測產物的錶達和定位.最後,利用親閤層析純化錶達產物,進行SDS-PAGE電泳和Western-blot檢測,同時採用ELISA和免疫熒光法檢測錶達產物的親和力和特異性.結果:測序及酶切鑒定錶明,人IgG3的CHi和Ck基因正確插入到pComb3中,大小分彆為324bp和333 bp,同時mAb HAb18的嵌閤Fab基因也分彆穫得正確組裝和錶達.錶達產物的分子質量約為45 ku,主要位于週質腔中.另外,ELISA和免疫熒光檢測證實,錶達產物含有人的抗體片段,併具有與相應抗原特異結閤的活性,親和力約為親本抗體的10%.結論:成功構建瞭人鼠嵌閤Fab抗體的通用錶達載體併製備瞭抗人肝癌小分子嵌閤Fab抗體,為其進一步在肝癌診斷與治療中的應用奠定瞭基礎.
목적:구건일개재대장간균중표체인서감합Fab항체적통용재체,병용우항인간암상관항원HAb18G인서감합Fab항체적표체.방법:이용특이인물PCR확증인IgG3적CHl화Ck기인,분별극륭도표체재체pComb3중,종이구건성인-서감합Fab항체적통용표체재체pComb3C.연후장확증적mAbHAbl8적VL화VH기인분별조장도통용표체재체중,매절거제gⅢ편단후,련접성위HAb18감합Fab항체적분비형표체재체pComb3C/cFab.전화대장간균후유도기표체,통과ELISA검측산물적표체화정위.최후,이용친합층석순화표체산물,진행SDS-PAGE전영화Western-blot검측,동시채용ELISA화면역형광법검측표체산물적친화력화특이성.결과:측서급매절감정표명,인IgG3적CHi화Ck기인정학삽입도pComb3중,대소분별위324bp화333 bp,동시mAb HAb18적감합Fab기인야분별획득정학조장화표체.표체산물적분자질량약위45 ku,주요위우주질강중.령외,ELISA화면역형광검측증실,표체산물함유인적항체편단,병구유여상응항원특이결합적활성,친화력약위친본항체적10%.결론:성공구건료인서감합Fab항체적통용표체재체병제비료항인간암소분자감합Fab항체,위기진일보재간암진단여치료중적응용전정료기출.
