微生物学免疫学进展
微生物學免疫學進展
미생물학면역학진전
PROGRESS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2010年
1期
7-13
,共7页
王革非%李卫中%张衡%曾俊%陈幼莹%陈小璇%李康生
王革非%李衛中%張衡%曾俊%陳幼瑩%陳小璇%李康生
왕혁비%리위중%장형%증준%진유형%진소선%리강생
流感病毒%H5N1%克隆%反向遗传%序列分析
流感病毒%H5N1%剋隆%反嚮遺傳%序列分析
류감병독%H5N1%극륭%반향유전%서렬분석
为明确广东地区分离的一株禽流感病毒H5N1的遗传背景,建立流感病毒反向遗传的平台.对该株禽流感病毒进行了空斑纯化与组织细胞培养,检测其在MDCK细胞中的增殖特性;利用H5N1病毒通用引物,通过RT-PCR对该病毒全基因组的8条片段进行全长克隆及测序分析;将H5N1的8条全长基因组片段分别插入反向遗传通用载体中,构建禽流感病毒H5N1的感染性克隆.结果表明,该H5N1毒株在MDCK细胞中可不依赖胰酶进行有效增殖与复制,可使MDCK细胞出现典型细胞病变,具有高致病性禽流感病毒的细胞增殖特征.RT-PCR克隆得到该H5N1毒株的PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS八条全长片段,经测序分析确认该毒株的基因序列,其内部编码序列出现多处突变,其中HA连接肽为多个连续碱性氨基酸,表明该毒株可不依赖胰酶进行有效复制,与细胞培养结果一致,未出现抗药性的遗传突变.PCR与测序证明,插入H5N1八个全长基因组片段的载体序列完全正确,表明成功构建了该毒株的感染性克隆.为明确病毒遗传信息,建立流感病毒反向遗传的平台,为进一步研究禽流感病毒相关疫苗提供了研究基础.
為明確廣東地區分離的一株禽流感病毒H5N1的遺傳揹景,建立流感病毒反嚮遺傳的平檯.對該株禽流感病毒進行瞭空斑純化與組織細胞培養,檢測其在MDCK細胞中的增殖特性;利用H5N1病毒通用引物,通過RT-PCR對該病毒全基因組的8條片段進行全長剋隆及測序分析;將H5N1的8條全長基因組片段分彆插入反嚮遺傳通用載體中,構建禽流感病毒H5N1的感染性剋隆.結果錶明,該H5N1毒株在MDCK細胞中可不依賴胰酶進行有效增殖與複製,可使MDCK細胞齣現典型細胞病變,具有高緻病性禽流感病毒的細胞增殖特徵.RT-PCR剋隆得到該H5N1毒株的PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS八條全長片段,經測序分析確認該毒株的基因序列,其內部編碼序列齣現多處突變,其中HA連接肽為多箇連續堿性氨基痠,錶明該毒株可不依賴胰酶進行有效複製,與細胞培養結果一緻,未齣現抗藥性的遺傳突變.PCR與測序證明,插入H5N1八箇全長基因組片段的載體序列完全正確,錶明成功構建瞭該毒株的感染性剋隆.為明確病毒遺傳信息,建立流感病毒反嚮遺傳的平檯,為進一步研究禽流感病毒相關疫苗提供瞭研究基礎.
위명학엄동지구분리적일주금류감병독H5N1적유전배경,건립류감병독반향유전적평태.대해주금류감병독진행료공반순화여조직세포배양,검측기재MDCK세포중적증식특성;이용H5N1병독통용인물,통과RT-PCR대해병독전기인조적8조편단진행전장극륭급측서분석;장H5N1적8조전장기인조편단분별삽입반향유전통용재체중,구건금류감병독H5N1적감염성극륭.결과표명,해H5N1독주재MDCK세포중가불의뢰이매진행유효증식여복제,가사MDCK세포출현전형세포병변,구유고치병성금류감병독적세포증식특정.RT-PCR극륭득도해H5N1독주적PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M화NS팔조전장편단,경측서분석학인해독주적기인서렬,기내부편마서렬출현다처돌변,기중HA련접태위다개련속감성안기산,표명해독주가불의뢰이매진행유효복제,여세포배양결과일치,미출현항약성적유전돌변.PCR여측서증명,삽입H5N1팔개전장기인조편단적재체서렬완전정학,표명성공구건료해독주적감염성극륭.위명학병독유전신식,건립류감병독반향유전적평태,위진일보연구금류감병독상관역묘제공료연구기출.
