稳定表达猪瘟病毒E2蛋白细胞系的建立及其生物活性分析
은정표체저온병독E2단백세포계적건립급기생물활성분석
  • 万方数据
    细胞与分子免疫学杂志 세포여분자면역학잡지

    2008年 7期 731-733 ,共3页

    田宏%刘湘涛%吴锦艳%尚佑军%郑海学%代兴国%孙世琪%谢庆阁

    전굉%류상도%오금염%상우군%정해학%대흥국%손세기%사경각

    猪瘟C株E2基因%重组逆转录病毒载体%PK15细胞%基因表达 豬瘟C株E2基因%重組逆轉錄病毒載體%PK15細胞%基因錶達
    저온C주E2기인%중조역전록병독재체%PK15세포%기인표체
    目的:建立一种能稳定表达猪瘟E2蛋白的真核细胞系,并对E2蛋白的生物活性进行分析.方法:从实验感染兔脾组织中提取总RNA,应用RT-PCR得到了CSFV C-株结构蛋白基因E2,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro.经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒.将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆.通过细胞传代并结合PCR、免疫荧光及ELISA方法对表达蛋白的生物活性进行分析.结果:初步检测显示所建立的PK15-E2细胞能稳定携带外源基因进行传代,而且表达的E2蛋白能被CSF阳性血清所识别,并具有良好的生物活性.结论:通过该方法建立的真核表达系统是切实可行的,能为猪瘟的预防和诊断奠定良好的基础.
    목적:건립일충능은정표체저온E2단백적진핵세포계,병대E2단백적생물활성진행분석.방법:종실험감염토비조직중제취총RNA,응용RT-PCR득도료CSFV C-주결구단백기인E2,병재목적편단적5′단인입Kozak서렬(Kozak,1987),정향극륭우역전록병독재체pBABE puro.경PCR、매절화서렬분석감정,획득양성중조질립.장해중조질립여수포성구염병독재체pVSV-G공전염GP2-293세포,수획가형병독,재Polybrene적개도하감염PK15세포,표령매소사선양성세포극륭.통과세포전대병결합PCR、면역형광급ELISA방법대표체단백적생물활성진행분석.결과:초보검측현시소건립적PK15-E2세포능은정휴대외원기인진행전대,이차표체적E2단백능피CSF양성혈청소식별,병구유량호적생물활성.결론:통과해방법건립적진핵표체계통시절실가행적,능위저온적예방화진단전정량호적기출.
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