南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2010年
4期
712-715
,共4页
杨洋%覃小翠%刘书虎%黄威%王雪敏
楊洋%覃小翠%劉書虎%黃威%王雪敏
양양%담소취%류서호%황위%왕설민
组蛋白脱乙酰化酶4%原核表达%融合蛋白
組蛋白脫乙酰化酶4%原覈錶達%融閤蛋白
조단백탈을선화매4%원핵표체%융합단백
目的 在大肠杆菌中分别表达组蛋白脱乙酰化酶4(HDAC4)N-末端(1-1950bp)和C-末端(1708-3255 bp)片段与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并进行纯化.方法 应用PCR方法扩增HDAC4 N-末端和C-末端片段,将目的基因插入GST融合载体pGEX-6P-1中,重组载体在酶切鉴定和序列测定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达GST-HDAC4-N'和GST-HDAC4-C'蛋白.经SDS-PAGE及Western blotting鉴定表达产物后,用谷胱苷肽琼脂糖珠纯化目的蛋白.结果 经测序、酶切鉴定证明成功构建了融合蛋白表达质粒,表达出的融合蛋白经SDS-PAGE分析其相对分子量约为110500和93080.Western blotting分析证实融合蛋白可以被HDAC4特异性抗体所识别.结论 成功构建了融合表达载体(pGEX-6P-1/HDAC4-N'和pGEX-6P-1/HDAC4-C'),并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可以进一步用于HDAC4与其他蛋白质相瓦作用的研究.
目的 在大腸桿菌中分彆錶達組蛋白脫乙酰化酶4(HDAC4)N-末耑(1-1950bp)和C-末耑(1708-3255 bp)片段與穀胱甘肽-S轉移酶(GST)的融閤蛋白,併進行純化.方法 應用PCR方法擴增HDAC4 N-末耑和C-末耑片段,將目的基因插入GST融閤載體pGEX-6P-1中,重組載體在酶切鑒定和序列測定後,在大腸桿菌中經IPTG誘導錶達GST-HDAC4-N'和GST-HDAC4-C'蛋白.經SDS-PAGE及Western blotting鑒定錶達產物後,用穀胱苷肽瓊脂糖珠純化目的蛋白.結果 經測序、酶切鑒定證明成功構建瞭融閤蛋白錶達質粒,錶達齣的融閤蛋白經SDS-PAGE分析其相對分子量約為110500和93080.Western blotting分析證實融閤蛋白可以被HDAC4特異性抗體所識彆.結論 成功構建瞭融閤錶達載體(pGEX-6P-1/HDAC4-N'和pGEX-6P-1/HDAC4-C'),併進行瞭融閤蛋白的誘導錶達和鑒定,可以進一步用于HDAC4與其他蛋白質相瓦作用的研究.
목적 재대장간균중분별표체조단백탈을선화매4(HDAC4)N-말단(1-1950bp)화C-말단(1708-3255 bp)편단여곡광감태-S전이매(GST)적융합단백,병진행순화.방법 응용PCR방법확증HDAC4 N-말단화C-말단편단,장목적기인삽입GST융합재체pGEX-6P-1중,중조재체재매절감정화서렬측정후,재대장간균중경IPTG유도표체GST-HDAC4-N'화GST-HDAC4-C'단백.경SDS-PAGE급Western blotting감정표체산물후,용곡광감태경지당주순화목적단백.결과 경측서、매절감정증명성공구건료융합단백표체질립,표체출적융합단백경SDS-PAGE분석기상대분자량약위110500화93080.Western blotting분석증실융합단백가이피HDAC4특이성항체소식별.결론 성공구건료융합표체재체(pGEX-6P-1/HDAC4-N'화pGEX-6P-1/HDAC4-C'),병진행료융합단백적유도표체화감정,가이진일보용우HDAC4여기타단백질상와작용적연구.
