生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2010年
3期
20-22
,共3页
陈英%卢福芝%曾丽娟%朱绮霞%张搏%韦宇拓%黄日波
陳英%盧福芝%曾麗娟%硃綺霞%張搏%韋宇拓%黃日波
진영%로복지%증려연%주기하%장박%위우탁%황일파
酿酒酵母%脂肪酶%基因克隆%毕赤酵母%表达
釀酒酵母%脂肪酶%基因剋隆%畢赤酵母%錶達
양주효모%지방매%기인극륭%필적효모%표체
目的:克隆Saccharomyces cerevisiae脂肪酶基因,并实现其在Pichia pastoris中高效表达.方法:根据NCBI GenBank中已公布的Saccharomsyes cerevisiae脂肪酶基因TGL3设计引物,以Saccharomyces cerevisiae总DNA为模板,PCR扩增目的片段,构建重组子pPIC9K-TGL3,转化到Pichia pastoris GS115.结果:扩增得到1 929bp的基因片段,与GenBank中公布的序列氨基酸同源性达99.7%,编码的643个氨基酸巾有脂肪酶的保守序列GXSXG,位于235～239位.重组子摇瓶发酵120h发酵液上清脂肪酶酶活达到60U/mL,酶学性质研究表明:该酶的最适作用温度为40℃,在25℃～40℃之间能保持60%以上酶活力.最适pH值为8.5,在pH6.5-9.0之问能保持50%以上的酶活力.除Al3+和Fe2+外,该酶不受Ca2+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Mn2+、Ni+、Sr2+等多种金属离子的影响.结论:发酵液上清脂肪酶酶活达到60U/mL,是原菌株的l0倍,成功实现了该基因的高效表达.
目的:剋隆Saccharomyces cerevisiae脂肪酶基因,併實現其在Pichia pastoris中高效錶達.方法:根據NCBI GenBank中已公佈的Saccharomsyes cerevisiae脂肪酶基因TGL3設計引物,以Saccharomyces cerevisiae總DNA為模闆,PCR擴增目的片段,構建重組子pPIC9K-TGL3,轉化到Pichia pastoris GS115.結果:擴增得到1 929bp的基因片段,與GenBank中公佈的序列氨基痠同源性達99.7%,編碼的643箇氨基痠巾有脂肪酶的保守序列GXSXG,位于235～239位.重組子搖瓶髮酵120h髮酵液上清脂肪酶酶活達到60U/mL,酶學性質研究錶明:該酶的最適作用溫度為40℃,在25℃～40℃之間能保持60%以上酶活力.最適pH值為8.5,在pH6.5-9.0之問能保持50%以上的酶活力.除Al3+和Fe2+外,該酶不受Ca2+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Mn2+、Ni+、Sr2+等多種金屬離子的影響.結論:髮酵液上清脂肪酶酶活達到60U/mL,是原菌株的l0倍,成功實現瞭該基因的高效錶達.
목적:극륭Saccharomyces cerevisiae지방매기인,병실현기재Pichia pastoris중고효표체.방법:근거NCBI GenBank중이공포적Saccharomsyes cerevisiae지방매기인TGL3설계인물,이Saccharomyces cerevisiae총DNA위모판,PCR확증목적편단,구건중조자pPIC9K-TGL3,전화도Pichia pastoris GS115.결과:확증득도1 929bp적기인편단,여GenBank중공포적서렬안기산동원성체99.7%,편마적643개안기산건유지방매적보수서렬GXSXG,위우235～239위.중조자요병발효120h발효액상청지방매매활체도60U/mL,매학성질연구표명:해매적최괄작용온도위40℃,재25℃～40℃지간능보지60%이상매활력.최괄pH치위8.5,재pH6.5-9.0지문능보지50%이상적매활력.제Al3+화Fe2+외,해매불수Ca2+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Mn2+、Ni+、Sr2+등다충금속리자적영향.결론:발효액상청지방매매활체도60U/mL,시원균주적l0배,성공실현료해기인적고효표체.
