基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2011年
3期
291-296
,共6页
刘东升%崔岩%申仑%杜延平%李桂林%王任直%王岩%张波
劉東升%崔巖%申崙%杜延平%李桂林%王任直%王巖%張波
류동승%최암%신륜%두연평%리계림%왕임직%왕암%장파
神经干细胞%SHH信号通路%Nmyc基因
神經榦細胞%SHH信號通路%Nmyc基因
신경간세포%SHH신호통로%Nmyc기인
目的 构建rAAV-SHH-N-EGFP载体并检测其对神经干细胞增殖相关基因影响.方法 分离并培养大鼠脑室下区神经干细胞,提取RNA、反转录、PCR得到SHH-N的cDNA,克隆入pSNAV2.0-CMV-IRES-EGFP,包装得到腺相关病毒rAAV-SHH-N-EGFP,感染神经干细胞48 h后,采用实时定量PCR检测SHH信号通路下游相关基因的mRNA水平变化,并观察rAAV-SHH-N-EGFP载体在神经干细胞内的表达情况.结果 (1)克隆得到SHH-N基因,测序结果与NCBI报道序列一致.(2)成功构建pSNAV2.0-CMV-SHH-N-EGFP表达载体并鉴定,包装得到rAAV-SHH-N-EGFP.(3)实时定量PCR分析rAAV-SHH-N-EGFP感染神经干细胞48 h后,rAAV-SHH-N-EGFP处理组较感染rAAV-EGFP的对照组,Glil和Nmyc的mRNA水平上调.(4)rAAV-SHH-N-EGFP可有效感染神经干细胞,在感染14 d后稳定表达SHH-N.结论 成功构建rAAV-SHH-N-EGFP过表达载体并使其在神经干细胞内稳定表达.过表达SHH-N可使神经干细胞内SHH信号通路相关基因Glil转录水平上调,并使细胞增殖相关基因Nmyc转录水平上调.
目的 構建rAAV-SHH-N-EGFP載體併檢測其對神經榦細胞增殖相關基因影響.方法 分離併培養大鼠腦室下區神經榦細胞,提取RNA、反轉錄、PCR得到SHH-N的cDNA,剋隆入pSNAV2.0-CMV-IRES-EGFP,包裝得到腺相關病毒rAAV-SHH-N-EGFP,感染神經榦細胞48 h後,採用實時定量PCR檢測SHH信號通路下遊相關基因的mRNA水平變化,併觀察rAAV-SHH-N-EGFP載體在神經榦細胞內的錶達情況.結果 (1)剋隆得到SHH-N基因,測序結果與NCBI報道序列一緻.(2)成功構建pSNAV2.0-CMV-SHH-N-EGFP錶達載體併鑒定,包裝得到rAAV-SHH-N-EGFP.(3)實時定量PCR分析rAAV-SHH-N-EGFP感染神經榦細胞48 h後,rAAV-SHH-N-EGFP處理組較感染rAAV-EGFP的對照組,Glil和Nmyc的mRNA水平上調.(4)rAAV-SHH-N-EGFP可有效感染神經榦細胞,在感染14 d後穩定錶達SHH-N.結論 成功構建rAAV-SHH-N-EGFP過錶達載體併使其在神經榦細胞內穩定錶達.過錶達SHH-N可使神經榦細胞內SHH信號通路相關基因Glil轉錄水平上調,併使細胞增殖相關基因Nmyc轉錄水平上調.
목적 구건rAAV-SHH-N-EGFP재체병검측기대신경간세포증식상관기인영향.방법 분리병배양대서뇌실하구신경간세포,제취RNA、반전록、PCR득도SHH-N적cDNA,극륭입pSNAV2.0-CMV-IRES-EGFP,포장득도선상관병독rAAV-SHH-N-EGFP,감염신경간세포48 h후,채용실시정량PCR검측SHH신호통로하유상관기인적mRNA수평변화,병관찰rAAV-SHH-N-EGFP재체재신경간세포내적표체정황.결과 (1)극륭득도SHH-N기인,측서결과여NCBI보도서렬일치.(2)성공구건pSNAV2.0-CMV-SHH-N-EGFP표체재체병감정,포장득도rAAV-SHH-N-EGFP.(3)실시정량PCR분석rAAV-SHH-N-EGFP감염신경간세포48 h후,rAAV-SHH-N-EGFP처리조교감염rAAV-EGFP적대조조,Glil화Nmyc적mRNA수평상조.(4)rAAV-SHH-N-EGFP가유효감염신경간세포,재감염14 d후은정표체SHH-N.결론 성공구건rAAV-SHH-N-EGFP과표체재체병사기재신경간세포내은정표체.과표체SHH-N가사신경간세포내SHH신호통로상관기인Glil전록수평상조,병사세포증식상관기인Nmyc전록수평상조.
