中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2011年
8期
691-695
,共5页
陈富超%孙万邦%封建凯%杜联峰%黄俊琼%罗军敏%宋明英
陳富超%孫萬邦%封建凱%杜聯峰%黃俊瓊%囉軍敏%宋明英
진부초%손만방%봉건개%두련봉%황준경%라군민%송명영
人白细胞介素10%毕赤酵母%细胞增殖%淋巴细胞转化试验
人白細胞介素10%畢赤酵母%細胞增殖%淋巴細胞轉化試驗
인백세포개소10%필적효모%세포증식%림파세포전화시험
目的:用毕赤酵母表达hIL-10并探索合适的表达条件,为IL-10生物制品研发及临床应用奠定基础.方法:以0.5%甲醇诱导酵母X-33表达rhIL-10,用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定rhIL-10,比较不同温度、不同pH值和有无PMSF条件下rhIL-10的表达水平.用ELISA法测定培养液rhIL-10含量,用Bradford法测定培养液总蛋白含量,计算rhIL-10占总蛋白的比例.以淋巴细胞转化试验分析rhIL-10的生物学活性.结果:SDS-PAGE后可见42 kD左右蛋白条带;Western blot也检测到42 kD左右特异性蛋白质条带.pH值为6.0、温度在28℃并加入抑制剂时rhIL-10表达量最高值为20 mg/L,同时段培养液中总蛋白质含量为50 mg/L,rhIL-10占总蛋白比例为40%.在外周血淋巴细胞转化试验中,rhIL-10抑制了淋巴细胞的增殖.结论:hIL-10能在毕赤酵母高效表达,表达产物有较好生物活性;发酵条件对rhIL-10的表达水平影响大,改善发酵条件能促进rhIL-10的表达.
目的:用畢赤酵母錶達hIL-10併探索閤適的錶達條件,為IL-10生物製品研髮及臨床應用奠定基礎.方法:以0.5%甲醇誘導酵母X-33錶達rhIL-10,用SDS-PAGE和Western blot分析鑒定rhIL-10,比較不同溫度、不同pH值和有無PMSF條件下rhIL-10的錶達水平.用ELISA法測定培養液rhIL-10含量,用Bradford法測定培養液總蛋白含量,計算rhIL-10佔總蛋白的比例.以淋巴細胞轉化試驗分析rhIL-10的生物學活性.結果:SDS-PAGE後可見42 kD左右蛋白條帶;Western blot也檢測到42 kD左右特異性蛋白質條帶.pH值為6.0、溫度在28℃併加入抑製劑時rhIL-10錶達量最高值為20 mg/L,同時段培養液中總蛋白質含量為50 mg/L,rhIL-10佔總蛋白比例為40%.在外週血淋巴細胞轉化試驗中,rhIL-10抑製瞭淋巴細胞的增殖.結論:hIL-10能在畢赤酵母高效錶達,錶達產物有較好生物活性;髮酵條件對rhIL-10的錶達水平影響大,改善髮酵條件能促進rhIL-10的錶達.
목적:용필적효모표체hIL-10병탐색합괄적표체조건,위IL-10생물제품연발급림상응용전정기출.방법:이0.5%갑순유도효모X-33표체rhIL-10,용SDS-PAGE화Western blot분석감정rhIL-10,비교불동온도、불동pH치화유무PMSF조건하rhIL-10적표체수평.용ELISA법측정배양액rhIL-10함량,용Bradford법측정배양액총단백함량,계산rhIL-10점총단백적비례.이림파세포전화시험분석rhIL-10적생물학활성.결과:SDS-PAGE후가견42 kD좌우단백조대;Western blot야검측도42 kD좌우특이성단백질조대.pH치위6.0、온도재28℃병가입억제제시rhIL-10표체량최고치위20 mg/L,동시단배양액중총단백질함량위50 mg/L,rhIL-10점총단백비례위40%.재외주혈림파세포전화시험중,rhIL-10억제료림파세포적증식.결론:hIL-10능재필적효모고효표체,표체산물유교호생물활성;발효조건대rhIL-10적표체수평영향대,개선발효조건능촉진rhIL-10적표체.
