畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
5期
54-57
,共4页
于天飞%邵淑丽%黎明%吕建伟%徐兴军
于天飛%邵淑麗%黎明%呂建偉%徐興軍
우천비%소숙려%려명%려건위%서흥군
TGEV%纤突蛋白%抗原表位%Dot-ELISA
TGEV%纖突蛋白%抗原錶位%Dot-ELISA
TGEV%섬돌단백%항원표위%Dot-ELISA
本研究分别用巴斯德毕赤酵母、杆状病毒和大肠杆菌表达系统中表达的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) TH-98株纤突蛋白(S)基因5’端含有B和C抗原位点的片段,利用Dot-ELISA方法对表达蛋白进行了抗原性比较分析,初步建市了以巴斯德毕赤酵母系统表达的重组蛋白为包被抗原的TGEV Dot-ELISA检测方法.结果表明:两种真核系统中表达的重组蛋白的抗原性相对更强.抗原最佳包被量为50 ng,抗体稀释度1∶100,最适封闭液为10 mg/L牛血清白蛋白,血清反应时间为60 min；酶标二抗的工作浓度为1∶ 1000,反应时间为30 min,底物在室温显色时间为5 min.本研究建立的Dot-ELISA方法对猪呼吸道冠状病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒和猪流行性腹泻病毒阳性血清的检测结果均为阴性,特异性良好.与Svanova TGEV/PRCV抗体诊断试剂盒比较,此方法的特异性和符合率分别为90％和87％.
本研究分彆用巴斯德畢赤酵母、桿狀病毒和大腸桿菌錶達繫統中錶達的豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV) TH-98株纖突蛋白(S)基因5’耑含有B和C抗原位點的片段,利用Dot-ELISA方法對錶達蛋白進行瞭抗原性比較分析,初步建市瞭以巴斯德畢赤酵母繫統錶達的重組蛋白為包被抗原的TGEV Dot-ELISA檢測方法.結果錶明:兩種真覈繫統中錶達的重組蛋白的抗原性相對更彊.抗原最佳包被量為50 ng,抗體稀釋度1∶100,最適封閉液為10 mg/L牛血清白蛋白,血清反應時間為60 min；酶標二抗的工作濃度為1∶ 1000,反應時間為30 min,底物在室溫顯色時間為5 min.本研究建立的Dot-ELISA方法對豬呼吸道冠狀病毒、豬輪狀病毒、豬瘟病毒和豬流行性腹瀉病毒暘性血清的檢測結果均為陰性,特異性良好.與Svanova TGEV/PRCV抗體診斷試劑盒比較,此方法的特異性和符閤率分彆為90％和87％.
본연구분별용파사덕필적효모、간상병독화대장간균표체계통중표체적저전염성위장염병독(TGEV) TH-98주섬돌단백(S)기인5’단함유B화C항원위점적편단,이용Dot-ELISA방법대표체단백진행료항원성비교분석,초보건시료이파사덕필적효모계통표체적중조단백위포피항원적TGEV Dot-ELISA검측방법.결과표명:량충진핵계통중표체적중조단백적항원성상대경강.항원최가포피량위50 ng,항체희석도1∶100,최괄봉폐액위10 mg/L우혈청백단백,혈청반응시간위60 min；매표이항적공작농도위1∶ 1000,반응시간위30 min,저물재실온현색시간위5 min.본연구건립적Dot-ELISA방법대저호흡도관상병독、저륜상병독、저온병독화저류행성복사병독양성혈청적검측결과균위음성,특이성량호.여Svanova TGEV/PRCV항체진단시제합비교,차방법적특이성화부합솔분별위90％화87％.
