畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
5期
21-25
,共5页
刘梅%吴健敏%黄红梅%白安斌%陈凤莲
劉梅%吳健敏%黃紅梅%白安斌%陳鳳蓮
류매%오건민%황홍매%백안빈%진봉련
兔出血症病毒%巴氏杆菌%双重PCR
兔齣血癥病毒%巴氏桿菌%雙重PCR
토출혈증병독%파씨간균%쌍중PCR
参照GenBank公布的免出血症病毒(RHDV) VP60、巴氏杆菌kmt基因序列,设计两对引物,分别用于扩增RHDV的VP60和巴氏杆菌kmt基因的目的片段.通过正交试验,对反应各组分浓度与组合、反应退火温度及反应参数进行优化,最后建立了RHDV、巴氏杆菌双重PCR检测方法并进行临床应用.结果显示:本试验建立的双重PCR检测方法能够特异性地检测RHDV及巴氏杆菌,最低核酸检出限分别达到70 pg和62pg.检测免源大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌,结果均为阴性.用本方法对临床送检的104份病料进行检测,结果检出RHDV与巴氏杆菌混合感染1份,巴氏杆菌单独感染10份,双重PCR检测结果与临床病原分离结果完全一致.表明本试验建立的兔出血症病毒和巴氏杆菌双重PCR检测方法具有良好的临床应用价值.
參照GenBank公佈的免齣血癥病毒(RHDV) VP60、巴氏桿菌kmt基因序列,設計兩對引物,分彆用于擴增RHDV的VP60和巴氏桿菌kmt基因的目的片段.通過正交試驗,對反應各組分濃度與組閤、反應退火溫度及反應參數進行優化,最後建立瞭RHDV、巴氏桿菌雙重PCR檢測方法併進行臨床應用.結果顯示:本試驗建立的雙重PCR檢測方法能夠特異性地檢測RHDV及巴氏桿菌,最低覈痠檢齣限分彆達到70 pg和62pg.檢測免源大腸桿菌、葡萄毬菌和鏈毬菌,結果均為陰性.用本方法對臨床送檢的104份病料進行檢測,結果檢齣RHDV與巴氏桿菌混閤感染1份,巴氏桿菌單獨感染10份,雙重PCR檢測結果與臨床病原分離結果完全一緻.錶明本試驗建立的兔齣血癥病毒和巴氏桿菌雙重PCR檢測方法具有良好的臨床應用價值.
삼조GenBank공포적면출혈증병독(RHDV) VP60、파씨간균kmt기인서렬,설계량대인물,분별용우확증RHDV적VP60화파씨간균kmt기인적목적편단.통과정교시험,대반응각조분농도여조합、반응퇴화온도급반응삼수진행우화,최후건립료RHDV、파씨간균쌍중PCR검측방법병진행림상응용.결과현시:본시험건립적쌍중PCR검측방법능구특이성지검측RHDV급파씨간균,최저핵산검출한분별체도70 pg화62pg.검측면원대장간균、포도구균화련구균,결과균위음성.용본방법대림상송검적104빈병료진행검측,결과검출RHDV여파씨간균혼합감염1빈,파씨간균단독감염10빈,쌍중PCR검측결과여림상병원분리결과완전일치.표명본시험건립적토출혈증병독화파씨간균쌍중PCR검측방법구유량호적림상응용개치.
