CAJ | 학술논문

目的构建淋病奈瑟球菌表面蛋白A(NspA)基因疫苗,并接种小鼠,评价其诱导的体液和细胞免疫应答.方法将NspA基因插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/NspA,并经PCR、双酶切及测序鉴定.反转录-聚合酶链反应(RT PCR)和免疫组织化学法分别检测NspA基因转染细胞后mRNA和蛋白的表达.以pcDNA3.1(+)/NspA重组质粒免疫45只雄性BALB/c小鼠,试管凝集法检测免疫小鼠抗体滴度,ELISA检测IFN-γ水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测脾淋巴细胞增殖.提取接种部位股四头肌总DNA,PCR检测BALB/c小鼠肌细胞内NspA基因.结果成功构建pcDNA3.1(+)/NspA基因疫苗,能在真核细胞中转录和表达.pcDNA3.1(+)/NspA免疫组的抗体滴度达1∶640,pcDNA3.1(+)和PBS免疫组均无特异性抗体检出.空载体pcDNA3.1(+)组IFN-γ为(23.79±11.85)pg/mL,pcDNA3.1(+)/NspA免疫组为(169.71±30.52)pg/mL(P＜0.01);脾淋巴细胞增殖的刺激指数(SI)分别为1.05±0.30和1.94±0.74(P＜0.01).并证实NspA基因可在小鼠肌细胞中稳定存在.结论构建淋病奈瑟球菌NspA基因疫苗,将其免疫BALB/c小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫应答,为进一步用于淋病预防奠定了基础.
목적 구건임병내슬구균표면단백A(NspA)기인역묘,병접충소서,평개기유도적체액화세포면역응답.방법 장NspA기인삽입도진핵표체재체pcDNA3.1(+)중,구건중조진핵표체질립pcDNA3.1(+)/NspA,병경PCR、쌍매절급측서감정.반전록-취합매련반응(RT PCR)화면역조직화학법분별검측NspA기인전염세포후mRNA화단백적표체.이pcDNA3.1(+)/NspA중조질립면역45지웅성BALB/c소서,시관응집법검측면역소서항체적도,ELISA검측IFN-γ수평,사갑기우담서람(MTT)비색법검측비림파세포증식.제취접충부위고사두기총DNA,PCR검측BALB/c소서기세포내NspA기인.결과 성공구건pcDNA3.1(+)/NspA기인역묘,능재진핵세포중전록화표체.pcDNA3.1(+)/NspA면역조적항체적도체1∶640,pcDNA3.1(+)화PBS면역조균무특이성항체검출.공재체pcDNA3.1(+)조IFN-γ위(23.79±11.85)pg/mL,pcDNA3.1(+)/NspA면역조위(169.71±30.52)pg/mL(P＜0.01);비림파세포증식적자격지수(SI)분별위1.05±0.30화1.94±0.74(P＜0.01).병증실NspA기인가재소서기세포중은정존재.결론 구건임병내슬구균NspA기인역묘,장기면역BALB/c소서가유도특이성체액화세포면역응답,위진일보용우임병예방전정료기출.