中华传染病杂志
中華傳染病雜誌
중화전염병잡지
CHINESE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES
2008年
1期
4-8
,共5页
高得勇%侯刚%张欣欣%金根娣%孔晓飞%张东华%龚启明%陆志檬
高得勇%侯剛%張訢訢%金根娣%孔曉飛%張東華%龔啟明%陸誌檬
고득용%후강%장흔흔%금근제%공효비%장동화%공계명%륙지몽
肝炎病毒%病毒融合蛋白质类%克隆,分子%病毒核心蛋白质类%基因表达
肝炎病毒%病毒融閤蛋白質類%剋隆,分子%病毒覈心蛋白質類%基因錶達
간염병독%병독융합단백질류%극륭,분자%병독핵심단백질류%기인표체
目的 在原核表达系统中诱导表达1b型HCV F蛋白及Core蛋白,建立F抗体ELISA检测方法,对F蛋白在慢性丙型肝炎患者体内的抗原性作相关研究.方法 应用RT-PCR方法从HCV感染者血清中获得Core蛋白编码基因,在第42位和144位人工增加或减少1个核苷酸,使其读码框移位,利用多重PCR技术拼接获得全长F蛋白的基因序列,分别构建编码F和Core蛋白的重组质粒.将鉴定正确的重组质粒转人大肠埃希菌BL21中,加入异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达HCV Core和F蛋白.应用镍离子亲和层析树脂纯化蛋白,并用Western印迹法鉴定其免疫原性.建立ELISA检测方法对121例慢性丙型肝炎患者血清巾抗F蛋白抗体进行检测.结果 成功构建含HCV F蛋白、Core蛋白编码基因的重组克隆,表达纯化获得的HCV F蛋白和Core蛋白,Western印迹法鉴定并确定其特异性.121例慢性丙型肝炎患者血清巾抗Core和抗F抗体的阳性率分别是93%和65%,而40例HBV感染者和40例健康对照者血清反应阴性.结论 F蛋白在HCV自然感染中有表达,并能产生特异的免疫反应,其生物学功能及在HCV感染过程中的作用有待进一步研究.
目的 在原覈錶達繫統中誘導錶達1b型HCV F蛋白及Core蛋白,建立F抗體ELISA檢測方法,對F蛋白在慢性丙型肝炎患者體內的抗原性作相關研究.方法 應用RT-PCR方法從HCV感染者血清中穫得Core蛋白編碼基因,在第42位和144位人工增加或減少1箇覈苷痠,使其讀碼框移位,利用多重PCR技術拼接穫得全長F蛋白的基因序列,分彆構建編碼F和Core蛋白的重組質粒.將鑒定正確的重組質粒轉人大腸埃希菌BL21中,加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導錶達HCV Core和F蛋白.應用鎳離子親和層析樹脂純化蛋白,併用Western印跡法鑒定其免疫原性.建立ELISA檢測方法對121例慢性丙型肝炎患者血清巾抗F蛋白抗體進行檢測.結果 成功構建含HCV F蛋白、Core蛋白編碼基因的重組剋隆,錶達純化穫得的HCV F蛋白和Core蛋白,Western印跡法鑒定併確定其特異性.121例慢性丙型肝炎患者血清巾抗Core和抗F抗體的暘性率分彆是93%和65%,而40例HBV感染者和40例健康對照者血清反應陰性.結論 F蛋白在HCV自然感染中有錶達,併能產生特異的免疫反應,其生物學功能及在HCV感染過程中的作用有待進一步研究.
목적 재원핵표체계통중유도표체1b형HCV F단백급Core단백,건립F항체ELISA검측방법,대F단백재만성병형간염환자체내적항원성작상관연구.방법 응용RT-PCR방법종HCV감염자혈청중획득Core단백편마기인,재제42위화144위인공증가혹감소1개핵감산,사기독마광이위,이용다중PCR기술병접획득전장F단백적기인서렬,분별구건편마F화Core단백적중조질립.장감정정학적중조질립전인대장애희균BL21중,가입이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도표체HCV Core화F단백.응용얼리자친화층석수지순화단백,병용Western인적법감정기면역원성.건립ELISA검측방법대121례만성병형간염환자혈청건항F단백항체진행검측.결과 성공구건함HCV F단백、Core단백편마기인적중조극륭,표체순화획득적HCV F단백화Core단백,Western인적법감정병학정기특이성.121례만성병형간염환자혈청건항Core화항F항체적양성솔분별시93%화65%,이40례HBV감염자화40례건강대조자혈청반응음성.결론 F단백재HCV자연감염중유표체,병능산생특이적면역반응,기생물학공능급재HCV감염과정중적작용유대진일보연구.
