浙江大学学报(医学版)
浙江大學學報(醫學版)
절강대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2003年
5期
403-406
,共4页
细胞色素P-450%癌,肝细胞%HepG2%黄曲霉素B1
細胞色素P-450%癌,肝細胞%HepG2%黃麯黴素B1
세포색소P-450%암,간세포%HepG2%황곡매소B1
目的:建立稳定表达人细胞的色素P450 1A2(CYP1A2)的HepG2细胞.方法:将所克隆的野生型CYP1A2 cDNA从重组质粒pGEM-CYP1A2中用Kpn Ⅰ/BamH Ⅰ双酶切,并亚克隆到哺乳动物细胞表达载体pREP9中.再将重组质粒转化感受态大肠杆菌Top10,用氨苄青霉素抗性筛选和限制酶谱鉴定.改良的磷酸钙介导的细胞转染法将重组质粒pREP9-CYP1A2转染肝癌细胞HepG2,用RT-PCR技术对转基因细胞的CYP1A2 mRNA表达作了分析,并用MTT法比较转基因细胞对黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒敏感试验.结果:与HepG2细胞相比,HepG2-CYP1A2转基因细胞表达CYP1A2 mRNA,能增强AFB1的细胞毒作用.结论:建立了稳定表达CYP1A2的转基因细胞系,可用于由CYP1A2参与的毒理学与药物代谢研究.
目的:建立穩定錶達人細胞的色素P450 1A2(CYP1A2)的HepG2細胞.方法:將所剋隆的野生型CYP1A2 cDNA從重組質粒pGEM-CYP1A2中用Kpn Ⅰ/BamH Ⅰ雙酶切,併亞剋隆到哺乳動物細胞錶達載體pREP9中.再將重組質粒轉化感受態大腸桿菌Top10,用氨芐青黴素抗性篩選和限製酶譜鑒定.改良的燐痠鈣介導的細胞轉染法將重組質粒pREP9-CYP1A2轉染肝癌細胞HepG2,用RT-PCR技術對轉基因細胞的CYP1A2 mRNA錶達作瞭分析,併用MTT法比較轉基因細胞對黃麯黴素B1(AFB1)細胞毒敏感試驗.結果:與HepG2細胞相比,HepG2-CYP1A2轉基因細胞錶達CYP1A2 mRNA,能增彊AFB1的細胞毒作用.結論:建立瞭穩定錶達CYP1A2的轉基因細胞繫,可用于由CYP1A2參與的毒理學與藥物代謝研究.
목적:건립은정표체인세포적색소P450 1A2(CYP1A2)적HepG2세포.방법:장소극륭적야생형CYP1A2 cDNA종중조질립pGEM-CYP1A2중용Kpn Ⅰ/BamH Ⅰ쌍매절,병아극륭도포유동물세포표체재체pREP9중.재장중조질립전화감수태대장간균Top10,용안변청매소항성사선화한제매보감정.개량적린산개개도적세포전염법장중조질립pREP9-CYP1A2전염간암세포HepG2,용RT-PCR기술대전기인세포적CYP1A2 mRNA표체작료분석,병용MTT법비교전기인세포대황곡매소B1(AFB1)세포독민감시험.결과:여HepG2세포상비,HepG2-CYP1A2전기인세포표체CYP1A2 mRNA,능증강AFB1적세포독작용.결론:건립료은정표체CYP1A2적전기인세포계,가용우유CYP1A2삼여적독이학여약물대사연구.
