世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2003年
10期
1520-1523
,共4页
阚全程%余祖江%雷延昌%杨东亮%郝连杰
闞全程%餘祖江%雷延昌%楊東亮%郝連傑
감전정%여조강%뢰연창%양동량%학련걸
目的:研究丙型肝炎病毒核糖体插入位点启动翻译蛋白质功能,构建双顺反子真核表达载体.方法:逆转录PCR(RT-PCR)扩增丙型肝炎基因组中核糖体插入位点序列(IRES),定向克隆到pcDNA3-S质粒多克隆酶切位点中.在IRES下游克隆乙型肝炎病毒核心基因,测序鉴定后获得的质粒经脂质体转染hepG2细胞,间接免疫荧光染色和Western-blot检测.结果:在间接免疫荧光染色后,荧光显微镜下可见乙型肝炎病毒S基因和核心基因表达.转染细胞破碎后免疫沉淀检测和图像分析表明,两种基因有相似的表达量.结论:人为截断HCV 5'NTR区17个碱基,并不影响IRES对下游基因蛋白质翻译,为成功构建了含丙型肝炎病毒IRES的双顺反子表达载体打下基础.
目的:研究丙型肝炎病毒覈糖體插入位點啟動翻譯蛋白質功能,構建雙順反子真覈錶達載體.方法:逆轉錄PCR(RT-PCR)擴增丙型肝炎基因組中覈糖體插入位點序列(IRES),定嚮剋隆到pcDNA3-S質粒多剋隆酶切位點中.在IRES下遊剋隆乙型肝炎病毒覈心基因,測序鑒定後穫得的質粒經脂質體轉染hepG2細胞,間接免疫熒光染色和Western-blot檢測.結果:在間接免疫熒光染色後,熒光顯微鏡下可見乙型肝炎病毒S基因和覈心基因錶達.轉染細胞破碎後免疫沉澱檢測和圖像分析錶明,兩種基因有相似的錶達量.結論:人為截斷HCV 5'NTR區17箇堿基,併不影響IRES對下遊基因蛋白質翻譯,為成功構建瞭含丙型肝炎病毒IRES的雙順反子錶達載體打下基礎.
목적:연구병형간염병독핵당체삽입위점계동번역단백질공능,구건쌍순반자진핵표체재체.방법:역전록PCR(RT-PCR)확증병형간염기인조중핵당체삽입위점서렬(IRES),정향극륭도pcDNA3-S질립다극륭매절위점중.재IRES하유극륭을형간염병독핵심기인,측서감정후획득적질립경지질체전염hepG2세포,간접면역형광염색화Western-blot검측.결과:재간접면역형광염색후,형광현미경하가견을형간염병독S기인화핵심기인표체.전염세포파쇄후면역침정검측화도상분석표명,량충기인유상사적표체량.결론:인위절단HCV 5'NTR구17개감기,병불영향IRES대하유기인단백질번역,위성공구건료함병형간염병독IRES적쌍순반자표체재체타하기출.
