温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2007年
1期
1-4
,共4页
王震%叶明君%邹立林%季敬璋%陈秀枢%吕建新
王震%葉明君%鄒立林%季敬璋%陳秀樞%呂建新
왕진%협명군%추립림%계경장%진수추%려건신
超广谱β-内酰胺酶%SHV-4%表达%纯化%特性
超廣譜β-內酰胺酶%SHV-4%錶達%純化%特性
초엄보β-내선알매%SHV-4%표체%순화%특성
目的:表达SHV-4型超广谱β-内酰胺酶,对纯化的SHY-4酶进行特性研究.方法:将SHV-4基因克隆到pET26b表达质粒,重组质粒转入E.coli BL21(DE3)构建工程菌,重组工程菌经摇瓶发酵后获得种子菌,种子菌转入发酵罐发酵,当菌体密度OD600为0.8时,加入诱导剂IPTG至终浓度为1.0 mmol/L,于37℃培养6 h.培养液离心收获菌体沉淀,其超声裂解上清液进行Ni2+亲和层析,获取的SHV-4酶进行分子量、纯度、等电点、最适条件、米氏常数、催化常数等特性进行分析.结果:SDS-PAGE电泳,等电聚焦电泳及系列的酶动力学实验表明SHV-4酶分子量约为30 kD,纯度大于95%,等电点为7.9,最适pH值为6.0～8.0,最适温度为37℃,以头孢硝噻吩为底物测定的Km值为2.61×10-6 mol/L,Kcat为258 s,Kcat/Km为9.88×107 mol-1·s-1·vL.结论:重组的SHV-4酶初步满足制成商品酶的条件.
目的:錶達SHV-4型超廣譜β-內酰胺酶,對純化的SHY-4酶進行特性研究.方法:將SHV-4基因剋隆到pET26b錶達質粒,重組質粒轉入E.coli BL21(DE3)構建工程菌,重組工程菌經搖瓶髮酵後穫得種子菌,種子菌轉入髮酵罐髮酵,噹菌體密度OD600為0.8時,加入誘導劑IPTG至終濃度為1.0 mmol/L,于37℃培養6 h.培養液離心收穫菌體沉澱,其超聲裂解上清液進行Ni2+親和層析,穫取的SHV-4酶進行分子量、純度、等電點、最適條件、米氏常數、催化常數等特性進行分析.結果:SDS-PAGE電泳,等電聚焦電泳及繫列的酶動力學實驗錶明SHV-4酶分子量約為30 kD,純度大于95%,等電點為7.9,最適pH值為6.0～8.0,最適溫度為37℃,以頭孢硝噻吩為底物測定的Km值為2.61×10-6 mol/L,Kcat為258 s,Kcat/Km為9.88×107 mol-1·s-1·vL.結論:重組的SHV-4酶初步滿足製成商品酶的條件.
목적:표체SHV-4형초엄보β-내선알매,대순화적SHY-4매진행특성연구.방법:장SHV-4기인극륭도pET26b표체질립,중조질립전입E.coli BL21(DE3)구건공정균,중조공정균경요병발효후획득충자균,충자균전입발효관발효,당균체밀도OD600위0.8시,가입유도제IPTG지종농도위1.0 mmol/L,우37℃배양6 h.배양액리심수획균체침정,기초성렬해상청액진행Ni2+친화층석,획취적SHV-4매진행분자량、순도、등전점、최괄조건、미씨상수、최화상수등특성진행분석.결과:SDS-PAGE전영,등전취초전영급계렬적매동역학실험표명SHV-4매분자량약위30 kD,순도대우95%,등전점위7.9,최괄pH치위6.0～8.0,최괄온도위37℃,이두포초새분위저물측정적Km치위2.61×10-6 mol/L,Kcat위258 s,Kcat/Km위9.88×107 mol-1·s-1·vL.결론:중조적SHV-4매초보만족제성상품매적조건.
