东北农业大学学报
東北農業大學學報
동북농업대학학보
JOURNAL OF NORTHEAST AGRICULTURAL UNIVERSITY
2009年
5期
62-67
,共6页
任桂萍%姜媛媛%刘铭瑶%孙国鹏%叶贤龙%李德山
任桂萍%薑媛媛%劉銘瑤%孫國鵬%葉賢龍%李德山
임계평%강원원%류명요%손국붕%협현룡%리덕산
SUMO%SUMO蛋白酶I%分子伴侣%鼠源FGF-21%葡萄糖吸收
SUMO%SUMO蛋白酶I%分子伴侶%鼠源FGF-21%葡萄糖吸收
SUMO%SUMO단백매I%분자반려%서원FGF-21%포도당흡수
利用SUMO表达载体在大肠杆菌中高效可溶性表达鼠源成纤维细胞生长因子(FGF-21)成熟蛋白,并研究其调节血糖的功能.将鼠源FGF-21成熟蛋白基因亚克隆至SUMO表达载体上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达,并用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组蛋白,透析后利用SUMO蛋白酶I切割融合蛋白,获得纯度较高的成熟蛋白.将3T3-L1成纤维细胞分化成脂肪细胞,经微量化的GOD-POD法检测培养基中葡萄糖含量,统计学分析葡萄糖消耗率.结果表明,在SUMO表达体系中鼠源FGF-21成熟蛋白基因以可溶形式表达,且可被SUMO蛋白酶I有效地切割,获得纯度较高的成熟蛋白.与未经处理的脂肪细胞对照组相比,经鼠源FGF-21成熟蛋白处理后脂肪细胞对葡萄糖的摄取利用显著增加,残存在培养基中的葡萄糖含量明显减少;两样本比较的t检验,P<0.001,差异极显著.
利用SUMO錶達載體在大腸桿菌中高效可溶性錶達鼠源成纖維細胞生長因子(FGF-21)成熟蛋白,併研究其調節血糖的功能.將鼠源FGF-21成熟蛋白基因亞剋隆至SUMO錶達載體上,在大腸桿菌Rosetta(DE3)中誘導錶達,併用鎳離子螯閤柱(Ni-NTA)純化重組蛋白,透析後利用SUMO蛋白酶I切割融閤蛋白,穫得純度較高的成熟蛋白.將3T3-L1成纖維細胞分化成脂肪細胞,經微量化的GOD-POD法檢測培養基中葡萄糖含量,統計學分析葡萄糖消耗率.結果錶明,在SUMO錶達體繫中鼠源FGF-21成熟蛋白基因以可溶形式錶達,且可被SUMO蛋白酶I有效地切割,穫得純度較高的成熟蛋白.與未經處理的脂肪細胞對照組相比,經鼠源FGF-21成熟蛋白處理後脂肪細胞對葡萄糖的攝取利用顯著增加,殘存在培養基中的葡萄糖含量明顯減少;兩樣本比較的t檢驗,P<0.001,差異極顯著.
이용SUMO표체재체재대장간균중고효가용성표체서원성섬유세포생장인자(FGF-21)성숙단백,병연구기조절혈당적공능.장서원FGF-21성숙단백기인아극륭지SUMO표체재체상,재대장간균Rosetta(DE3)중유도표체,병용얼리자오합주(Ni-NTA)순화중조단백,투석후이용SUMO단백매I절할융합단백,획득순도교고적성숙단백.장3T3-L1성섬유세포분화성지방세포,경미양화적GOD-POD법검측배양기중포도당함량,통계학분석포도당소모솔.결과표명,재SUMO표체체계중서원FGF-21성숙단백기인이가용형식표체,차가피SUMO단백매I유효지절할,획득순도교고적성숙단백.여미경처리적지방세포대조조상비,경서원FGF-21성숙단백처리후지방세포대포도당적섭취이용현저증가,잔존재배양기중적포도당함량명현감소;량양본비교적t검험,P<0.001,차이겁현저.
