兰州大学学报（自然科学版）
蘭州大學學報（自然科學版）
란주대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF LANZHOU UNIVERSITY（NATURAL SCIENCES）
2009年
3期
61-66,72
,共7页
刘泽寰%唐根云%全艳彩%龚映雪%肖文娟%王峻梅
劉澤寰%唐根雲%全豔綵%龔映雪%肖文娟%王峻梅
류택환%당근운%전염채%공영설%초문연%왕준매
绿色木霉%β-葡萄糖苷酶Ⅰ%酿酒酵母%表达%乙醇
綠色木黴%β-葡萄糖苷酶Ⅰ%釀酒酵母%錶達%乙醇
록색목매%β-포도당감매Ⅰ%양주효모%표체%을순
采用反转录PCR方法从绿色木霉AS3.3711的总mRNA中获得了编码β-葡萄糖苷酶Ⅰ(BGL Ⅰ)的基因bgl1.序列测定表明该基因片段长2235 bp,编码744个氨基酸残基,与里氏木霉的bgl1序列完全相同.将其插入高拷贝数整合型表达载体PScIKP,构建了重组质粒PScIKP-bgl1.线性化后转化工业酿酒酵母AS2.489菌株,利用高浓度G418筛选高抗转化子,经SDS-PAGE蛋白电泳证明获得了能高效稳定分泌表达重组BGL Ⅰ的转化子.重组BGL Ⅰ酶能直接水解培养液中的纤维二糖,在84 h测得酶活最大值为0.978 u/mL.重组BGL Ⅰ酶最佳反应温度为60℃,最适反应pH为4.0～5.0,并且能以纤维二糖为惟一碳源发酵乙醇,发酵90h能够用重铬酸钾氧化比色法检测到乙醇的体积分数为0.51%.结果表明:成功克隆并在酿酒酵母中表达了一种高活性的β-葡萄糖苷酶,对于工业上直接利用纤维素为惟一碳源发酵生产乙醇的研究有重要意义.
採用反轉錄PCR方法從綠色木黴AS3.3711的總mRNA中穫得瞭編碼β-葡萄糖苷酶Ⅰ(BGL Ⅰ)的基因bgl1.序列測定錶明該基因片段長2235 bp,編碼744箇氨基痠殘基,與裏氏木黴的bgl1序列完全相同.將其插入高拷貝數整閤型錶達載體PScIKP,構建瞭重組質粒PScIKP-bgl1.線性化後轉化工業釀酒酵母AS2.489菌株,利用高濃度G418篩選高抗轉化子,經SDS-PAGE蛋白電泳證明穫得瞭能高效穩定分泌錶達重組BGL Ⅰ的轉化子.重組BGL Ⅰ酶能直接水解培養液中的纖維二糖,在84 h測得酶活最大值為0.978 u/mL.重組BGL Ⅰ酶最佳反應溫度為60℃,最適反應pH為4.0～5.0,併且能以纖維二糖為惟一碳源髮酵乙醇,髮酵90h能夠用重鉻痠鉀氧化比色法檢測到乙醇的體積分數為0.51%.結果錶明:成功剋隆併在釀酒酵母中錶達瞭一種高活性的β-葡萄糖苷酶,對于工業上直接利用纖維素為惟一碳源髮酵生產乙醇的研究有重要意義.
채용반전록PCR방법종록색목매AS3.3711적총mRNA중획득료편마β-포도당감매Ⅰ(BGL Ⅰ)적기인bgl1.서렬측정표명해기인편단장2235 bp,편마744개안기산잔기,여리씨목매적bgl1서렬완전상동.장기삽입고고패수정합형표체재체PScIKP,구건료중조질립PScIKP-bgl1.선성화후전화공업양주효모AS2.489균주,이용고농도G418사선고항전화자,경SDS-PAGE단백전영증명획득료능고효은정분비표체중조BGL Ⅰ적전화자.중조BGL Ⅰ매능직접수해배양액중적섬유이당,재84 h측득매활최대치위0.978 u/mL.중조BGL Ⅰ매최가반응온도위60℃,최괄반응pH위4.0～5.0,병차능이섬유이당위유일탄원발효을순,발효90h능구용중락산갑양화비색법검측도을순적체적분수위0.51%.결과표명:성공극륭병재양주효모중표체료일충고활성적β-포도당감매,대우공업상직접이용섬유소위유일탄원발효생산을순적연구유중요의의.
