中国抗生素杂志
中國抗生素雜誌
중국항생소잡지
CHINESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS
2009年
8期
467-470,511
,共5页
王晻%郝雪秦%高鹏%杨延辉%肖春玲
王晻%郝雪秦%高鵬%楊延輝%肖春玲
왕엄%학설진%고붕%양연휘%초춘령
柠檬酸裂解酶%筛选模型%异柠檬酸裂解酶抑制剂%高通镀筛选
檸檬痠裂解酶%篩選模型%異檸檬痠裂解酶抑製劑%高通鍍篩選
저몽산렬해매%사선모형%이저몽산렬해매억제제%고통도사선
目的 制备结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶(isocitrate lyase,ICL)并建立ICL抑制剂筛选模型.方法 通过四步层析法或金属螯合层析法纯化大肠埃希菌BL21(DE3)表达的ICL,并以异柠檬酸为底物,用纯化的ICL裂解舁柠檬酸,生成乙醛酸可与苯肼反应生成苯腙,苯腙在324nm波长下产生光吸收峰,测定酶促反应体系在324nm波长下光吸收检测异柠檬酸裂解酶的活性,根据待测样品对酶活性的抑制程度,筛选异柠檬酸裂解酶抑制剂.结果 用金属螯和层析法得到纯度为90%、比活力为2.8U/mg的ICL,建立并优化ICL抑制剂筛选模型,模型的信噪比(S/N)远大于3,变异系数(CV)远小于10%.结论 通过金属螯合层析法获得了特异性高、稳定性好的ICL抑制剂筛选模型,该模型可有效的应用于异柠檬酸裂解酶抑制剂的高通量筛选.
目的 製備結覈分枝桿菌異檸檬痠裂解酶(isocitrate lyase,ICL)併建立ICL抑製劑篩選模型.方法 通過四步層析法或金屬螯閤層析法純化大腸埃希菌BL21(DE3)錶達的ICL,併以異檸檬痠為底物,用純化的ICL裂解舁檸檬痠,生成乙醛痠可與苯肼反應生成苯腙,苯腙在324nm波長下產生光吸收峰,測定酶促反應體繫在324nm波長下光吸收檢測異檸檬痠裂解酶的活性,根據待測樣品對酶活性的抑製程度,篩選異檸檬痠裂解酶抑製劑.結果 用金屬螯和層析法得到純度為90%、比活力為2.8U/mg的ICL,建立併優化ICL抑製劑篩選模型,模型的信譟比(S/N)遠大于3,變異繫數(CV)遠小于10%.結論 通過金屬螯閤層析法穫得瞭特異性高、穩定性好的ICL抑製劑篩選模型,該模型可有效的應用于異檸檬痠裂解酶抑製劑的高通量篩選.
목적 제비결핵분지간균이저몽산렬해매(isocitrate lyase,ICL)병건립ICL억제제사선모형.방법 통과사보층석법혹금속오합층석법순화대장애희균BL21(DE3)표체적ICL,병이이저몽산위저물,용순화적ICL렬해여저몽산,생성을철산가여분정반응생성분종,분종재324nm파장하산생광흡수봉,측정매촉반응체계재324nm파장하광흡수검측이저몽산렬해매적활성,근거대측양품대매활성적억제정도,사선이저몽산렬해매억제제.결과 용금속오화층석법득도순도위90%、비활력위2.8U/mg적ICL,건립병우화ICL억제제사선모형,모형적신조비(S/N)원대우3,변이계수(CV)원소우10%.결론 통과금속오합층석법획득료특이성고、은정성호적ICL억제제사선모형,해모형가유효적응용우이저몽산렬해매억제제적고통량사선.
