CAJ | 학술논문

目的探讨指甲游离缘及毛发中抽提核DNA的方法,并对抽提结果进行评估.方法采集5名健康成人志愿者指甲游离缘、发根及发干样本各30份.分别用无水乙醇和蒸馏水浸泡样本,去除外源性DNA.每份指甲游离缘样本为3 mg指甲游离缘碎片;每份发根或发干样本各为3段0.3～0.5 cm发根或发干.分别采用酚氯仿法、Chelex-100法和QIAamp(R) DNA Investigator试剂盒法抽提3种样本的核DNA,并运用PCR扩增对抽提DNA进行评估.扩增片段位于不同染色体上,长度分别为188、248、300和741 bp.PCR扩增产物用1.8%琼脂糖凝胶电泳检测.为探讨样本量对抽提结果的影响,任意取指甲游离缘1、3和5 mg,发根及发干各1、3和5根重复实验,并比较结果.初步探讨增加Taq酶量对黑色素抑制的消除作用.结果在3种抽提方法中长度为248 bp的引物扩增成功率均为最高.指甲游离缘样本使用试剂盒法抽提核DNA PCR扩增成功率显著高于酚氯仿法及Chelex-100法(P<0.05).发干样本使用试剂盒法抽提核DNA PCR扩增成功率显著高于酚氯仿法(P<0.05).发根样本3种方法抽提核DNA PCR扩增成功率差异无统计学意义(P>0.05).指甲游离缘样本的PCR扩增成功率显著高于发根及发干样本(P<0.05),发根和发干样本的PCR扩增成功率差异无统计学意义.试剂盒法抽提指甲游离缘、发根和发干核DNA PCR扩增成功率随样本量增加而提高.酚氯仿法和Chelex-100法抽提发根或发干样本核DNA PCR扩增成功率随样本量增加呈下降趋势,提示可能存在黑色素抑制作用.增加Taq酶量对于消除黑色素抑制有一定作用.结论 ①3种抽提方法均能成功从指甲游离缘及毛发中抽提到核DNA,试剂盒法成功率最高.②指甲游离缘、发根和发干均可作为核DNA采样源,从指甲游离缘抽提DNA成功率最高.
목적 탐토지갑유리연급모발중추제핵DNA적방법,병대추제결과진행평고.방법 채집5명건강성인지원자지갑유리연、발근급발간양본각30빈.분별용무수을순화증류수침포양본,거제외원성DNA.매빈지갑유리연양본위3 mg지갑유리연쇄편;매빈발근혹발간양본각위3단0.3～0.5 cm발근혹발간.분별채용분록방법、Chelex-100법화QIAamp(R) DNA Investigator시제합법추제3충양본적핵DNA,병운용PCR확증대추제DNA진행평고.확증편단위우불동염색체상,장도분별위188、248、300화741 bp.PCR확증산물용1.8%경지당응효전영검측.위탐토양본량대추제결과적영향,임의취지갑유리연1、3화5 mg,발근급발간각1、3화5근중복실험,병비교결과.초보탐토증가Taq매량대흑색소억제적소제작용.결과 재3충추제방법중장도위248 bp적인물확증성공솔균위최고.지갑유리연양본사용시제합법추제핵DNA PCR확증성공솔현저고우분록방법급Chelex-100법(P<0.05).발간양본사용시제합법추제핵DNA PCR확증성공솔현저고우분록방법(P<0.05).발근양본3충방법추제핵DNA PCR확증성공솔차이무통계학의의(P>0.05).지갑유리연양본적PCR확증성공솔현저고우발근급발간양본(P<0.05),발근화발간양본적PCR확증성공솔차이무통계학의의.시제합법추제지갑유리연、발근화발간핵DNA PCR확증성공솔수양본량증가이제고.분록방법화Chelex-100법추제발근혹발간양본핵DNA PCR확증성공솔수양본량증가정하강추세,제시가능존재흑색소억제작용.증가Taq매량대우소제흑색소억제유일정작용.결론 ①3충추제방법균능성공종지갑유리연급모발중추제도핵DNA,시제합법성공솔최고.②지갑유리연、발근화발간균가작위핵DNA채양원,종지갑유리연추제DNA성공솔최고.