南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2010年
4期
859-862,866
,共5页
survivin基因%短发夹状RNA%慢病毒%异位内膜细胞%子宫内膜异位症
survivin基因%短髮夾狀RNA%慢病毒%異位內膜細胞%子宮內膜異位癥
survivin기인%단발협상RNA%만병독%이위내막세포%자궁내막이위증
目的 构建靶向人survivin基因的短发夹状RNA(shRNA)慢病毒载体,观察其对异位内膜细胞survivin基因的抑制作用.方法 设计干扰人survivin基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核酸后克隆到pGCL-GFP载体,PCR鉴定和测序分析及阳性克隆质粒抽提,在脂质体的介导下将慢病毒包装辅助质粒和survivin基因重组慢病毒载体导入293T细胞包装病毒,测定病毒滴度.感染人异位子宫内膜细胞,采用RT-PCR测定细胞中survivin mRNA的表达,并与未转染及空转染细胞进行比较.结果 慢病毒载体PCR和测序结果与预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为8×10 8U/ml.Survivin shRNA慢病毒载体感染人异位内膜细胞后,Survivin mRNA水平为0.15±0.03,明显低于阴性对照组0.42±0.06和空白对照组0.48±0.08(P<0.01);而阴性对照组与空白对照组相比无统计学差异.结论 成功构建针对survivin基因的shRNA慢病毒载体,体外感染人异位内膜细胞后可有效抑制survivin基因的表达,为研究子宫内膜异位症分子病冈和基因治疗提供了新的平台.
目的 構建靶嚮人survivin基因的短髮夾狀RNA(shRNA)慢病毒載體,觀察其對異位內膜細胞survivin基因的抑製作用.方法 設計榦擾人survivin基因shRNA序列,閤成、退火形成雙鏈寡覈痠後剋隆到pGCL-GFP載體,PCR鑒定和測序分析及暘性剋隆質粒抽提,在脂質體的介導下將慢病毒包裝輔助質粒和survivin基因重組慢病毒載體導入293T細胞包裝病毒,測定病毒滴度.感染人異位子宮內膜細胞,採用RT-PCR測定細胞中survivin mRNA的錶達,併與未轉染及空轉染細胞進行比較.結果 慢病毒載體PCR和測序結果與預期結果一緻,經包裝產生的病毒滴度為8×10 8U/ml.Survivin shRNA慢病毒載體感染人異位內膜細胞後,Survivin mRNA水平為0.15±0.03,明顯低于陰性對照組0.42±0.06和空白對照組0.48±0.08(P<0.01);而陰性對照組與空白對照組相比無統計學差異.結論 成功構建針對survivin基因的shRNA慢病毒載體,體外感染人異位內膜細胞後可有效抑製survivin基因的錶達,為研究子宮內膜異位癥分子病岡和基因治療提供瞭新的平檯.
목적 구건파향인survivin기인적단발협상RNA(shRNA)만병독재체,관찰기대이위내막세포survivin기인적억제작용.방법 설계간우인survivin기인shRNA서렬,합성、퇴화형성쌍련과핵산후극륭도pGCL-GFP재체,PCR감정화측서분석급양성극륭질립추제,재지질체적개도하장만병독포장보조질립화survivin기인중조만병독재체도입293T세포포장병독,측정병독적도.감염인이위자궁내막세포,채용RT-PCR측정세포중survivin mRNA적표체,병여미전염급공전염세포진행비교.결과 만병독재체PCR화측서결과여예기결과일치,경포장산생적병독적도위8×10 8U/ml.Survivin shRNA만병독재체감염인이위내막세포후,Survivin mRNA수평위0.15±0.03,명현저우음성대조조0.42±0.06화공백대조조0.48±0.08(P<0.01);이음성대조조여공백대조조상비무통계학차이.결론 성공구건침대survivin기인적shRNA만병독재체,체외감염인이위내막세포후가유효억제survivin기인적표체,위연구자궁내막이위증분자병강화기인치료제공료신적평태.
