中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2010年
6期
1217-1220
,共4页
王乐禹%蒋萱%余磊%胡哓芳%汪海仪%欧阳钧%邱小忠
王樂禹%蔣萱%餘磊%鬍嘵芳%汪海儀%歐暘鈞%邱小忠
왕악우%장훤%여뢰%호효방%왕해의%구양균%구소충
骨重建%脂多糖类%成骨细胞%NF-κB
骨重建%脂多糖類%成骨細胞%NF-κB
골중건%지다당류%성골세포%NF-κB
目的:研究LPS-NF-κB信号通路在骨形成过程中的作用.方法: MC3T3-E1成骨细胞常规培养,待细胞融合率为80%时,分别加入100 μg/L和500 μg/L LPS处理6 h.流式细胞仪检测细胞周期,计算细胞DNA相对增殖指数;RT-PCR法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达;蛋白质印迹法(Western blotting)检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65蛋白的表达;细胞免疫荧光法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65的核易位情况;电泳迁移率变动分析(EMSA)LPS处理MC3T3-E1细胞后NF-κB活力的变化情况.结果: 100 μg/L和500 μg/L LPS可诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖;LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达与正常组比较无显著变化(P>0.05),而NF-κB p65蛋白的表达明显高于对照组(P<0.01);LPS处理成骨细胞后免疫荧光法可明显观察到NF-κB p65从细胞质转移入细胞核,且EMSA结果显示LPS处理组细胞核内NF-κB结合活性增加.结论: 低浓度的LPS可促使成骨细胞增殖,此过程中并不影响NF-κB p65的基因表达水平,但能增加NF-κB p65蛋白的表达并提高细胞核内NF-κB的结合活性.
目的:研究LPS-NF-κB信號通路在骨形成過程中的作用.方法: MC3T3-E1成骨細胞常規培養,待細胞融閤率為80%時,分彆加入100 μg/L和500 μg/L LPS處理6 h.流式細胞儀檢測細胞週期,計算細胞DNA相對增殖指數;RT-PCR法檢測LPS處理成骨細胞後NF-κB mRNA的錶達;蛋白質印跡法(Western blotting)檢測LPS處理成骨細胞後NF-κB p65蛋白的錶達;細胞免疫熒光法檢測LPS處理成骨細胞後NF-κB p65的覈易位情況;電泳遷移率變動分析(EMSA)LPS處理MC3T3-E1細胞後NF-κB活力的變化情況.結果: 100 μg/L和500 μg/L LPS可誘導MC3T3-E1成骨細胞增殖;LPS處理成骨細胞後NF-κB mRNA的錶達與正常組比較無顯著變化(P>0.05),而NF-κB p65蛋白的錶達明顯高于對照組(P<0.01);LPS處理成骨細胞後免疫熒光法可明顯觀察到NF-κB p65從細胞質轉移入細胞覈,且EMSA結果顯示LPS處理組細胞覈內NF-κB結閤活性增加.結論: 低濃度的LPS可促使成骨細胞增殖,此過程中併不影響NF-κB p65的基因錶達水平,但能增加NF-κB p65蛋白的錶達併提高細胞覈內NF-κB的結閤活性.
목적:연구LPS-NF-κB신호통로재골형성과정중적작용.방법: MC3T3-E1성골세포상규배양,대세포융합솔위80%시,분별가입100 μg/L화500 μg/L LPS처리6 h.류식세포의검측세포주기,계산세포DNA상대증식지수;RT-PCR법검측LPS처리성골세포후NF-κB mRNA적표체;단백질인적법(Western blotting)검측LPS처리성골세포후NF-κB p65단백적표체;세포면역형광법검측LPS처리성골세포후NF-κB p65적핵역위정황;전영천이솔변동분석(EMSA)LPS처리MC3T3-E1세포후NF-κB활력적변화정황.결과: 100 μg/L화500 μg/L LPS가유도MC3T3-E1성골세포증식;LPS처리성골세포후NF-κB mRNA적표체여정상조비교무현저변화(P>0.05),이NF-κB p65단백적표체명현고우대조조(P<0.01);LPS처리성골세포후면역형광법가명현관찰도NF-κB p65종세포질전이입세포핵,차EMSA결과현시LPS처리조세포핵내NF-κB결합활성증가.결론: 저농도적LPS가촉사성골세포증식,차과정중병불영향NF-κB p65적기인표체수평,단능증가NF-κB p65단백적표체병제고세포핵내NF-κB적결합활성.
