浙江农业学报
浙江農業學報
절강농업학보
ACTA AGRICULTURAE ZHEJIANGENSIS
2010年
2期
145-149
,共5页
王光华%周继章%蔺国珍%郑福英%曹小安%邱昌庆
王光華%週繼章%藺國珍%鄭福英%曹小安%邱昌慶
왕광화%주계장%린국진%정복영%조소안%구창경
产气荚膜梭菌%α毒素基因%基因克隆%核苷酸序列
產氣莢膜梭菌%α毒素基因%基因剋隆%覈苷痠序列
산기협막사균%α독소기인%기인극륭%핵감산서렬
用PCR技术,从一株田间分离的产气荚膜梭菌基因组中扩增出了1 194 bp的α毒素基因,经限制性核酸内切酶EcoR Ⅰ和Nco Ⅰ双酶切处理后将其连接在经同样内切酶处理的载体pET-28a(+)中的相应位点上,最后转化至受体菌BL21(DE3)中.经PCR、双酶切和核苷酸序列分析,证明重组质粒pET-28a-CPA含有产气荚膜梭菌α毒素基因,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,目的基因获得了良好表达.以羊抗α毒素多克隆血清进行Western blot分析,抗血清可与该融合蛋白发生特异性反应,表明目的蛋白具有较好的免疫原性.
用PCR技術,從一株田間分離的產氣莢膜梭菌基因組中擴增齣瞭1 194 bp的α毒素基因,經限製性覈痠內切酶EcoR Ⅰ和Nco Ⅰ雙酶切處理後將其連接在經同樣內切酶處理的載體pET-28a(+)中的相應位點上,最後轉化至受體菌BL21(DE3)中.經PCR、雙酶切和覈苷痠序列分析,證明重組質粒pET-28a-CPA含有產氣莢膜梭菌α毒素基因,再將其轉化至大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導,目的基因穫得瞭良好錶達.以羊抗α毒素多剋隆血清進行Western blot分析,抗血清可與該融閤蛋白髮生特異性反應,錶明目的蛋白具有較好的免疫原性.
용PCR기술,종일주전간분리적산기협막사균기인조중확증출료1 194 bp적α독소기인,경한제성핵산내절매EcoR Ⅰ화Nco Ⅰ쌍매절처리후장기련접재경동양내절매처리적재체pET-28a(+)중적상응위점상,최후전화지수체균BL21(DE3)중.경PCR、쌍매절화핵감산서렬분석,증명중조질립pET-28a-CPA함유산기협막사균α독소기인,재장기전화지대장간균BL21(DE3),경IPTG유도,목적기인획득료량호표체.이양항α독소다극륭혈청진행Western blot분석,항혈청가여해융합단백발생특이성반응,표명목적단백구유교호적면역원성.
