动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2010年
9期
63-67
,共5页
梁晓艳%李玉林%李兆学%王继美%贾丽锋%周贺娟%王云龙
樑曉豔%李玉林%李兆學%王繼美%賈麗鋒%週賀娟%王雲龍
량효염%리옥림%리조학%왕계미%가려봉%주하연%왕운룡
猪圆环病毒%ORF2%原核表达%免疫原性
豬圓環病毒%ORF2%原覈錶達%免疫原性
저원배병독%ORF2%원핵표체%면역원성
以病猪脾脏组织为材料,提取总RNA,通过RT-PCR得到579 bp的猪圆环病毒2型(PCV-2)/ORF2片段,与原核表达载体pET32a重组,通过菌落PCR鉴定、双酶切鉴定及测序鉴定后,证实重组质粒pET32a/ORF2构建成功,将其转化入表达菌Balgold,通过IPTG诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析纯化目的产物,Western blot验证其免疫原性,重组蛋白免疫Balb/c小鼠,检测小鼠体内中和抗体滴度.获得的重组蛋白包涵体的形式出现,表达量占菌体总蛋白的30%,变性纯化后纯度达90%以上,Western blot证实重组蛋白能与PCV-2阳性血清发生反应,免疫Balb/c小鼠45 d后中和抗体滴度达到1∶22.
以病豬脾髒組織為材料,提取總RNA,通過RT-PCR得到579 bp的豬圓環病毒2型(PCV-2)/ORF2片段,與原覈錶達載體pET32a重組,通過菌落PCR鑒定、雙酶切鑒定及測序鑒定後,證實重組質粒pET32a/ORF2構建成功,將其轉化入錶達菌Balgold,通過IPTG誘導錶達,利用Ni-NTA親和層析純化目的產物,Western blot驗證其免疫原性,重組蛋白免疫Balb/c小鼠,檢測小鼠體內中和抗體滴度.穫得的重組蛋白包涵體的形式齣現,錶達量佔菌體總蛋白的30%,變性純化後純度達90%以上,Western blot證實重組蛋白能與PCV-2暘性血清髮生反應,免疫Balb/c小鼠45 d後中和抗體滴度達到1∶22.
이병저비장조직위재료,제취총RNA,통과RT-PCR득도579 bp적저원배병독2형(PCV-2)/ORF2편단,여원핵표체재체pET32a중조,통과균락PCR감정、쌍매절감정급측서감정후,증실중조질립pET32a/ORF2구건성공,장기전화입표체균Balgold,통과IPTG유도표체,이용Ni-NTA친화층석순화목적산물,Western blot험증기면역원성,중조단백면역Balb/c소서,검측소서체내중화항체적도.획득적중조단백포함체적형식출현,표체량점균체총단백적30%,변성순화후순도체90%이상,Western blot증실중조단백능여PCV-2양성혈청발생반응,면역Balb/c소서45 d후중화항체적도체도1∶22.
