山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2011年
15期
19-21
,共3页
刘洁%钟鸣%李自娟%朱莉%郭艳%任美思
劉潔%鐘鳴%李自娟%硃莉%郭豔%任美思
류길%종명%리자연%주리%곽염%임미사
细胞周期蛋白G2%绿色荧光蛋白%基因载体
細胞週期蛋白G2%綠色熒光蛋白%基因載體
세포주기단백G2%록색형광단백%기인재체
目的 为进一步探讨细胞周期蛋白G2(CCNG2)基因功能奠定基础.方法 以成人脑cDNA文库为模板,PCR扩增人CCNG2基因,In-Fusion技术定向克隆到pENTR1A中,酶切测序鉴定后重组到pcDNA6.2TM/EmGFP-DEST Gateway载体,构建pcDNA6.2-EmGFP-G2.将鉴定正确的质粒瞬时转染人舌鳞癌细胞Tca-8113,24 h后观察,定量PCR检测CCNG2 mRNA表达.结果 扩增得到1 032 bp的基因片段,经测序验证与GenBank中人CCNG2序列相符;pcDNA6.2-EmGFP-G2经酶切和测序鉴定无误.转染Tca-8113后,荧光信号除在胞质中表达外,在部分细胞的胞核DAPI染色弱信号区浓聚.转染该重组质粒后CCNG2 mRNA表达水平显著增高.结论 成功构建了以绿色荧光蛋白作为报告基因的CCNG2表达载体,为进一步研究CCNG2基因功能奠定了基础.
目的 為進一步探討細胞週期蛋白G2(CCNG2)基因功能奠定基礎.方法 以成人腦cDNA文庫為模闆,PCR擴增人CCNG2基因,In-Fusion技術定嚮剋隆到pENTR1A中,酶切測序鑒定後重組到pcDNA6.2TM/EmGFP-DEST Gateway載體,構建pcDNA6.2-EmGFP-G2.將鑒定正確的質粒瞬時轉染人舌鱗癌細胞Tca-8113,24 h後觀察,定量PCR檢測CCNG2 mRNA錶達.結果 擴增得到1 032 bp的基因片段,經測序驗證與GenBank中人CCNG2序列相符;pcDNA6.2-EmGFP-G2經酶切和測序鑒定無誤.轉染Tca-8113後,熒光信號除在胞質中錶達外,在部分細胞的胞覈DAPI染色弱信號區濃聚.轉染該重組質粒後CCNG2 mRNA錶達水平顯著增高.結論 成功構建瞭以綠色熒光蛋白作為報告基因的CCNG2錶達載體,為進一步研究CCNG2基因功能奠定瞭基礎.
목적 위진일보탐토세포주기단백G2(CCNG2)기인공능전정기출.방법 이성인뇌cDNA문고위모판,PCR확증인CCNG2기인,In-Fusion기술정향극륭도pENTR1A중,매절측서감정후중조도pcDNA6.2TM/EmGFP-DEST Gateway재체,구건pcDNA6.2-EmGFP-G2.장감정정학적질립순시전염인설린암세포Tca-8113,24 h후관찰,정량PCR검측CCNG2 mRNA표체.결과 확증득도1 032 bp적기인편단,경측서험증여GenBank중인CCNG2서렬상부;pcDNA6.2-EmGFP-G2경매절화측서감정무오.전염Tca-8113후,형광신호제재포질중표체외,재부분세포적포핵DAPI염색약신호구농취.전염해중조질립후CCNG2 mRNA표체수평현저증고.결론 성공구건료이록색형광단백작위보고기인적CCNG2표체재체,위진일보연구CCNG2기인공능전정료기출.
