现代临床医学生物工程学杂志
現代臨床醫學生物工程學雜誌
현대림상의학생물공정학잡지
2006年
4期
362-365
,共4页
CAD基因%原核表达%DNA降解实验
CAD基因%原覈錶達%DNA降解實驗
CAD기인%원핵표체%DNA강해실험
目的 构建pCool-GST-ICAD/CAD的表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达具有生物学活性的CAD核酸酶.方法 用PCR扩增CAD基因, 将扩增产物克隆入pCool-GST-ICAD载体中构建出pCool-GST-ICAD/CAD表达载体.经酶切和电泳鉴定正确后,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物经亲和层析、离子交换层析及凝胶过滤等方法分离纯化,最后用SDS-PAGE和DNA降解实验进行鉴定.结果 构建了pCool-GST-ICAD/CAD原核表达载体,重组载体转化后表达出毫克级水平的GST-ICAD/CAD蛋白复合体.经分离纯化后得到纯度很好的CAD-ICAD蛋白复合体,在SDS-PAGE电泳上呈现清晰的两条蛋白带.经DNA降解实验证明纯化所得的CAD蛋白具有非特异性降解DNA的核酸酶作用.结论 成功制备了具有生物学活性的CAD核酸酶,为进一步研究细胞凋亡的作用机制提供了有效的制剂.
目的 構建pCool-GST-ICAD/CAD的錶達載體,併在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達具有生物學活性的CAD覈痠酶.方法 用PCR擴增CAD基因, 將擴增產物剋隆入pCool-GST-ICAD載體中構建齣pCool-GST-ICAD/CAD錶達載體.經酶切和電泳鑒定正確後,在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導錶達,錶達產物經親和層析、離子交換層析及凝膠過濾等方法分離純化,最後用SDS-PAGE和DNA降解實驗進行鑒定.結果 構建瞭pCool-GST-ICAD/CAD原覈錶達載體,重組載體轉化後錶達齣毫剋級水平的GST-ICAD/CAD蛋白複閤體.經分離純化後得到純度很好的CAD-ICAD蛋白複閤體,在SDS-PAGE電泳上呈現清晰的兩條蛋白帶.經DNA降解實驗證明純化所得的CAD蛋白具有非特異性降解DNA的覈痠酶作用.結論 成功製備瞭具有生物學活性的CAD覈痠酶,為進一步研究細胞凋亡的作用機製提供瞭有效的製劑.
목적 구건pCool-GST-ICAD/CAD적표체재체,병재대장간균BL21(DE3)중표체구유생물학활성적CAD핵산매.방법 용PCR확증CAD기인, 장확증산물극륭입pCool-GST-ICAD재체중구건출pCool-GST-ICAD/CAD표체재체.경매절화전영감정정학후,재대장간균BL21(DE3)중유도표체,표체산물경친화층석、리자교환층석급응효과려등방법분리순화,최후용SDS-PAGE화DNA강해실험진행감정.결과 구건료pCool-GST-ICAD/CAD원핵표체재체,중조재체전화후표체출호극급수평적GST-ICAD/CAD단백복합체.경분리순화후득도순도흔호적CAD-ICAD단백복합체,재SDS-PAGE전영상정현청석적량조단백대.경DNA강해실험증명순화소득적CAD단백구유비특이성강해DNA적핵산매작용.결론 성공제비료구유생물학활성적CAD핵산매,위진일보연구세포조망적작용궤제제공료유효적제제.
