上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2012年
10期
1302-1306
,共5页
贾志刚%方勇%姚敏%俞为荣%徐鹏%贾一韬%倪涛
賈誌剛%方勇%姚敏%俞為榮%徐鵬%賈一韜%倪濤
가지강%방용%요민%유위영%서붕%가일도%예도
P物质%人皮肤成纤维细胞%核因子κB%单核细胞趋化蛋白1
P物質%人皮膚成纖維細胞%覈因子κB%單覈細胞趨化蛋白1
P물질%인피부성섬유세포%핵인자κB%단핵세포추화단백1
目的 探讨神经肽P物质(SP)诱导高糖培养环境中的人皮肤成纤维细胞分泌单核细胞趋化蛋白1 (MCP-1)的分子机制.方法 采用高糖DMEM培养基培养人皮肤成纤维细胞,加入同一浓度(10 nmol/L) SP孵育不同时间,Western blotting检测细胞中核因子κB(NF-κB)抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p-IκBα)和磷酸化NF-κB亚单位p65 (p-NF-κBp65)的表达,免疫荧光方法观测细胞p-NF-κBp65表达和转位情况.将高糖DMEM培养基培养人皮肤成纤维细胞分为对照组、SP组和SP+ NF-κB抑制剂(MG132)组(以MG132预处理细胞60 min),Western blotting检测各组细胞内p-NF-κBp65的表达,ELISA方法测定细胞培养上清液中MCP-1的浓度.结果 随着SP作用时间的延长,成纤维细胞IκBα的表达量显著减少,p-IkBα的表达量显著增加(P＜0.05)；同时p-NF-κBp65的表达量在SP作用后显著增加(P＜0.05),并保持递增趋势；免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察证实SP作用后细胞胞核内p-NF-κBp65表达增强.与SP组比较,SP+ MG132组细胞p-NF-κBp65表达及细胞培养上清液中MCP-1浓度均显著降低(P＜0.05).结论 SP促进人皮肤成纤维细胞分泌MCP-1的作用机制可能与NF-κB信号通路激活有关.
目的 探討神經肽P物質(SP)誘導高糖培養環境中的人皮膚成纖維細胞分泌單覈細胞趨化蛋白1 (MCP-1)的分子機製.方法 採用高糖DMEM培養基培養人皮膚成纖維細胞,加入同一濃度(10 nmol/L) SP孵育不同時間,Western blotting檢測細胞中覈因子κB(NF-κB)抑製蛋白α(IκBα)、燐痠化IκBα(p-IκBα)和燐痠化NF-κB亞單位p65 (p-NF-κBp65)的錶達,免疫熒光方法觀測細胞p-NF-κBp65錶達和轉位情況.將高糖DMEM培養基培養人皮膚成纖維細胞分為對照組、SP組和SP+ NF-κB抑製劑(MG132)組(以MG132預處理細胞60 min),Western blotting檢測各組細胞內p-NF-κBp65的錶達,ELISA方法測定細胞培養上清液中MCP-1的濃度.結果 隨著SP作用時間的延長,成纖維細胞IκBα的錶達量顯著減少,p-IkBα的錶達量顯著增加(P＜0.05)；同時p-NF-κBp65的錶達量在SP作用後顯著增加(P＜0.05),併保持遞增趨勢；免疫熒光染色激光共聚焦顯微鏡觀察證實SP作用後細胞胞覈內p-NF-κBp65錶達增彊.與SP組比較,SP+ MG132組細胞p-NF-κBp65錶達及細胞培養上清液中MCP-1濃度均顯著降低(P＜0.05).結論 SP促進人皮膚成纖維細胞分泌MCP-1的作用機製可能與NF-κB信號通路激活有關.
목적 탐토신경태P물질(SP)유도고당배양배경중적인피부성섬유세포분비단핵세포추화단백1 (MCP-1)적분자궤제.방법 채용고당DMEM배양기배양인피부성섬유세포,가입동일농도(10 nmol/L) SP부육불동시간,Western blotting검측세포중핵인자κB(NF-κB)억제단백α(IκBα)、린산화IκBα(p-IκBα)화린산화NF-κB아단위p65 (p-NF-κBp65)적표체,면역형광방법관측세포p-NF-κBp65표체화전위정황.장고당DMEM배양기배양인피부성섬유세포분위대조조、SP조화SP+ NF-κB억제제(MG132)조(이MG132예처리세포60 min),Western blotting검측각조세포내p-NF-κBp65적표체,ELISA방법측정세포배양상청액중MCP-1적농도.결과 수착SP작용시간적연장,성섬유세포IκBα적표체량현저감소,p-IkBα적표체량현저증가(P＜0.05)；동시p-NF-κBp65적표체량재SP작용후현저증가(P＜0.05),병보지체증추세；면역형광염색격광공취초현미경관찰증실SP작용후세포포핵내p-NF-κBp65표체증강.여SP조비교,SP+ MG132조세포p-NF-κBp65표체급세포배양상청액중MCP-1농도균현저강저(P＜0.05).결론 SP촉진인피부성섬유세포분비MCP-1적작용궤제가능여NF-κB신호통로격활유관.
