中华实验外科杂志
中華實驗外科雜誌
중화실험외과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY
2006年
1期
45-48
,共4页
聂明明%方国恩%王星华%苏长青%崔贞福%李林芳%钱其军
聶明明%方國恩%王星華%囌長青%崔貞福%李林芳%錢其軍
섭명명%방국은%왕성화%소장청%최정복%리림방%전기군
基因治疗%病毒%肿瘤%端粒酶%内皮抑素
基因治療%病毒%腫瘤%耑粒酶%內皮抑素
기인치료%병독%종류%단립매%내피억소
目的构建一种新型的肿瘤基因-病毒治疗系统CNHK300-murine endostatin (CNHK300-mE),以肿瘤增殖病毒为载体,携带抗肿瘤新生血管生成的基因.方法利用基因重组技术将人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子插入腺病毒E1A基因上游,将小鼠内皮抑素基因表达盒插入到腺病毒包装信号和hTERT启动子之间,通过病毒增殖试验、电镜技术、Western blot分析、酶联免疫吸附实验(ELISA)、鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验,观察CNHK300-mE的复制情况、mE的表达情况及对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的抑制情况.结果成功构建了基因-病毒治疗系统CNHK300-mE,该系统为hTERT启动子调控腺病毒E1A基因表达并携带小鼠内皮抑素基因的重组腺病毒.该病毒可以在端粒酶阳性的胃癌细胞株SGC-7901和肝癌细胞株HepGⅡ中大量增殖及复制,而在端粒酶阴性的正常纤维细胞中不增殖.电镜证实该重组病毒在胃癌细胞株SGC-7901中复制及增殖.ELISA检测表明SGC-7901感染CNHK300-mE后7 d,小鼠内皮抑素的表达量为1 000μg/L.CAM实验证实该病毒感染胃癌细胞后的培养液上清具有抗新生血管生成的生物活性.结论基因-病毒治疗系统CNHK300-mE能在端粒酶阳性的肿瘤细胞中特异性增殖复制,并大量表达具有抗新生血管生成生物活性的小鼠内皮抑素.
目的構建一種新型的腫瘤基因-病毒治療繫統CNHK300-murine endostatin (CNHK300-mE),以腫瘤增殖病毒為載體,攜帶抗腫瘤新生血管生成的基因.方法利用基因重組技術將人耑粒酶逆轉錄酶(hTERT)啟動子插入腺病毒E1A基因上遊,將小鼠內皮抑素基因錶達盒插入到腺病毒包裝信號和hTERT啟動子之間,通過病毒增殖試驗、電鏡技術、Western blot分析、酶聯免疫吸附實驗(ELISA)、鷄胚絨毛尿囊膜(CAM)試驗,觀察CNHK300-mE的複製情況、mE的錶達情況及對鷄胚絨毛尿囊膜新生血管的抑製情況.結果成功構建瞭基因-病毒治療繫統CNHK300-mE,該繫統為hTERT啟動子調控腺病毒E1A基因錶達併攜帶小鼠內皮抑素基因的重組腺病毒.該病毒可以在耑粒酶暘性的胃癌細胞株SGC-7901和肝癌細胞株HepGⅡ中大量增殖及複製,而在耑粒酶陰性的正常纖維細胞中不增殖.電鏡證實該重組病毒在胃癌細胞株SGC-7901中複製及增殖.ELISA檢測錶明SGC-7901感染CNHK300-mE後7 d,小鼠內皮抑素的錶達量為1 000μg/L.CAM實驗證實該病毒感染胃癌細胞後的培養液上清具有抗新生血管生成的生物活性.結論基因-病毒治療繫統CNHK300-mE能在耑粒酶暘性的腫瘤細胞中特異性增殖複製,併大量錶達具有抗新生血管生成生物活性的小鼠內皮抑素.
목적구건일충신형적종류기인-병독치료계통CNHK300-murine endostatin (CNHK300-mE),이종류증식병독위재체,휴대항종류신생혈관생성적기인.방법이용기인중조기술장인단립매역전록매(hTERT)계동자삽입선병독E1A기인상유,장소서내피억소기인표체합삽입도선병독포장신호화hTERT계동자지간,통과병독증식시험、전경기술、Western blot분석、매련면역흡부실험(ELISA)、계배융모뇨낭막(CAM)시험,관찰CNHK300-mE적복제정황、mE적표체정황급대계배융모뇨낭막신생혈관적억제정황.결과성공구건료기인-병독치료계통CNHK300-mE,해계통위hTERT계동자조공선병독E1A기인표체병휴대소서내피억소기인적중조선병독.해병독가이재단립매양성적위암세포주SGC-7901화간암세포주HepGⅡ중대량증식급복제,이재단립매음성적정상섬유세포중불증식.전경증실해중조병독재위암세포주SGC-7901중복제급증식.ELISA검측표명SGC-7901감염CNHK300-mE후7 d,소서내피억소적표체량위1 000μg/L.CAM실험증실해병독감염위암세포후적배양액상청구유항신생혈관생성적생물활성.결론기인-병독치료계통CNHK300-mE능재단립매양성적종류세포중특이성증식복제,병대량표체구유항신생혈관생성생물활성적소서내피억소.
