CAJ | 학술논문

目的: 构建galectin-3 shRNA真核表达载体,观察该基因的抑制对大肠癌细胞系lovo细胞增殖率的影响. 方法: 以未转染lovo细胞作为阳性对照组,转染空质粒的lovo细胞作为阴性对照组,将针对人galectin-3基因的不同部位设计的长度约140 bp的shRNA,插入到真核表达载体PRNAT-U6.1并转染人大肠癌细胞lovo,双酶切鉴定重组载体,免疫荧光检测转染效果, RT-PCR和Western-Blot检测其对该基因mRNA和蛋白水平的抑制,MTT测定干扰后对lovo细胞增殖率的影响. 结果: 双酶切出一条约120 bp的DNA片断,与插入片断长度相符. PRNAT-U6.1/Galectin-3 shRNA表达载体顺势转染lovo细胞72 h后检测转染效率及Galectin-3在mRNA和蛋白水平的表达情况, 免疫荧光检测转染效率为62%. 转染PRNAT-U6.1/Galectin-3 shRNA的lovo细胞Galectin-3的表达在mRNA和蛋白水平均明显下降,各组间比较F=2.214,148.566, P=0.000, 0.000,阴性组和阳性对照组相比,P=0.448,0.263. 干扰后细胞继续生长,与干扰前相比,生长明显减慢,F=20.830, P=0.000, 组间比较F=149.710, P=0.000,shRNA干扰组与阴性组和阳性组比较,P=0.000, 0.000. 结论: 成功构建Galectin-3 shRNA表达载体,干扰后Galectin-3在mRNA和蛋白水平的表达明显降低,Galectin-3表达的抑制可能会导致大肠癌细胞lovo增殖率的降低.
목적: 구건galectin-3 shRNA진핵표체재체,관찰해기인적억제대대장암세포계lovo세포증식솔적영향. 방법: 이미전염lovo세포작위양성대조조,전염공질립적lovo세포작위음성대조조,장침대인galectin-3기인적불동부위설계적장도약140 bp적shRNA,삽입도진핵표체재체PRNAT-U6.1병전염인대장암세포lovo,쌍매절감정중조재체,면역형광검측전염효과, RT-PCR화Western-Blot검측기대해기인mRNA화단백수평적억제,MTT측정간우후대lovo세포증식솔적영향. 결과: 쌍매절출일조약120 bp적DNA편단,여삽입편단장도상부. PRNAT-U6.1/Galectin-3 shRNA표체재체순세전염lovo세포72 h후검측전염효솔급Galectin-3재mRNA화단백수평적표체정황, 면역형광검측전염효솔위62%. 전염PRNAT-U6.1/Galectin-3 shRNA적lovo세포Galectin-3적표체재mRNA화단백수평균명현하강,각조간비교F=2.214,148.566, P=0.000, 0.000,음성조화양성대조조상비,P=0.448,0.263. 간우후세포계속생장,여간우전상비,생장명현감만,F=20.830, P=0.000, 조간비교F=149.710, P=0.000,shRNA간우조여음성조화양성조비교,P=0.000, 0.000. 결론: 성공구건Galectin-3 shRNA표체재체,간우후Galectin-3재mRNA화단백수평적표체명현강저,Galectin-3표체적억제가능회도치대장암세포lovo증식솔적강저.