河北医药
河北醫藥
하북의약
HEBEI MEDICAL JOURNAL
2007年
8期
779-782
,共4页
李香兰%张广宇%吴雪琼%李建行%陈素丽%谢兰品
李香蘭%張廣宇%吳雪瓊%李建行%陳素麗%謝蘭品
리향란%장엄우%오설경%리건행%진소려%사란품
结核分支杆菌%Mtb81蛋白%克隆%表达%纯化%免疫反应性%抗原特异性
結覈分支桿菌%Mtb81蛋白%剋隆%錶達%純化%免疫反應性%抗原特異性
결핵분지간균%Mtb81단백%극륭%표체%순화%면역반응성%항원특이성
目的 通过结核分支杆菌Mtb81基因在大肠杆菌中的表达, 获得大量纯化的重组Mtb81蛋白.通过Western -blot和ELISA方法评价Mtb81抗原,检测血清中抗结核抗体的灵敏度和特异性,为进行结核病血清学诊断打下基础.方法 应用PCR技术扩增结核分支杆菌H37Rv Mtb81DNA序列;构建pET24b-Mtb81重组质粒,然后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3);通过Western-blot鉴定重组Mtb81蛋白,采用Chelating Sepharose Fast Flow纯化重组 Mtb81蛋白;将纯化的重组Mtb81蛋白通过Western-blot、酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测结核病人及正常人血清中的抗体,应用Microsoft Excel软件统计分析实验数据.结果 pET24b-Mtb81在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%左右.纯化后的Mtb81样品经SDS-PAGE和光密度扫描分析表明其纯度为95%左右.纯化后的Mtb81蛋白通过Western-blot鉴定,结果显示:加入结核病人血清抗体于目的蛋白位置有一条显色带,而加入正常人血清组则无显色反应;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测30例结核病人及正常人血清中的抗体,结果显示:rMtb81的特异性和灵敏度分别为96%、93%.结论 pET24b -Mtb81大肠杆菌工程菌株能高效表达Mtb81蛋白,Western-blot结果证明表达蛋白具有很好的免疫反应性和抗原特异性;ELISA结果证明重组Mtb81检测结核病人血清中的抗结核抗体,具有较高的灵敏度和特异性.
目的 通過結覈分支桿菌Mtb81基因在大腸桿菌中的錶達, 穫得大量純化的重組Mtb81蛋白.通過Western -blot和ELISA方法評價Mtb81抗原,檢測血清中抗結覈抗體的靈敏度和特異性,為進行結覈病血清學診斷打下基礎.方法 應用PCR技術擴增結覈分支桿菌H37Rv Mtb81DNA序列;構建pET24b-Mtb81重組質粒,然後轉化入錶達宿主大腸桿菌BL21(DE3);通過Western-blot鑒定重組Mtb81蛋白,採用Chelating Sepharose Fast Flow純化重組 Mtb81蛋白;將純化的重組Mtb81蛋白通過Western-blot、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)方法,檢測結覈病人及正常人血清中的抗體,應用Microsoft Excel軟件統計分析實驗數據.結果 pET24b-Mtb81在大腸桿菌BL21(DE3)細胞內以包涵體形式存在,錶達量佔菌體總蛋白的30%左右.純化後的Mtb81樣品經SDS-PAGE和光密度掃描分析錶明其純度為95%左右.純化後的Mtb81蛋白通過Western-blot鑒定,結果顯示:加入結覈病人血清抗體于目的蛋白位置有一條顯色帶,而加入正常人血清組則無顯色反應;酶聯免疫吸附試驗(ELISA)方法,檢測30例結覈病人及正常人血清中的抗體,結果顯示:rMtb81的特異性和靈敏度分彆為96%、93%.結論 pET24b -Mtb81大腸桿菌工程菌株能高效錶達Mtb81蛋白,Western-blot結果證明錶達蛋白具有很好的免疫反應性和抗原特異性;ELISA結果證明重組Mtb81檢測結覈病人血清中的抗結覈抗體,具有較高的靈敏度和特異性.
목적 통과결핵분지간균Mtb81기인재대장간균중적표체, 획득대량순화적중조Mtb81단백.통과Western -blot화ELISA방법평개Mtb81항원,검측혈청중항결핵항체적령민도화특이성,위진행결핵병혈청학진단타하기출.방법 응용PCR기술확증결핵분지간균H37Rv Mtb81DNA서렬;구건pET24b-Mtb81중조질립,연후전화입표체숙주대장간균BL21(DE3);통과Western-blot감정중조Mtb81단백,채용Chelating Sepharose Fast Flow순화중조 Mtb81단백;장순화적중조Mtb81단백통과Western-blot、매련면역흡부시험(ELISA)방법,검측결핵병인급정상인혈청중적항체,응용Microsoft Excel연건통계분석실험수거.결과 pET24b-Mtb81재대장간균BL21(DE3)세포내이포함체형식존재,표체량점균체총단백적30%좌우.순화후적Mtb81양품경SDS-PAGE화광밀도소묘분석표명기순도위95%좌우.순화후적Mtb81단백통과Western-blot감정,결과현시:가입결핵병인혈청항체우목적단백위치유일조현색대,이가입정상인혈청조칙무현색반응;매련면역흡부시험(ELISA)방법,검측30례결핵병인급정상인혈청중적항체,결과현시:rMtb81적특이성화령민도분별위96%、93%.결론 pET24b -Mtb81대장간균공정균주능고효표체Mtb81단백,Western-blot결과증명표체단백구유흔호적면역반응성화항원특이성;ELISA결과증명중조Mtb81검측결핵병인혈청중적항결핵항체,구유교고적령민도화특이성.
