寄生虫与医学昆虫学报
寄生蟲與醫學昆蟲學報
기생충여의학곤충학보
ACTA PARASITOLOGICA ET MEDICA ENTOMOLOGICA SINICA
2007年
3期
129-134
,共6页
刘居理%许铭炎%许锦阶%傅玉才
劉居理%許銘炎%許錦階%傅玉纔
류거리%허명염%허금계%부옥재
LAG1基因%阴道毛滴虫%启动子%报告基因载体%细胞转染
LAG1基因%陰道毛滴蟲%啟動子%報告基因載體%細胞轉染
LAG1기인%음도모적충%계동자%보고기인재체%세포전염
本研究旨在克隆并分析阴道毛滴虫LAG1基因启动子,为进一步研究在细胞衰老过程中LAG1基因的转录调控提供实验资料.预测启动子所在区域,用PCR技术扩增启动子区序列,并分别克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic及增强型绿色荧光蛋白报告基因载体pEGFP-1,用脂质体介导的方法瞬时转染EC109细胞,然后测定荧光素酶表达活性及观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果表明在构建的6种荧光素酶报告基因表达体系及2种增强型绿色荧光蛋白报告基因表达体系中,表达载体pGL3-455(-455~+55 bp)、pGL3-417(-417~+55 bp)、pGL3-280(-280~+55 bp)、pGL3-202(-202~+55 bp)、pGt3-81(-81~+55 bp)的荧光素酶表达活性相近,均明显高于表达载体pGL347(-47~+55 bp)荧光素酶表达活性,而pGL3-47表达载体荧光素酶表达活性极低,与阴性对照活性相近,提示-47~+55 bp区无启动子活性.绿色荧光蛋白的表达情况也类似,pEGFP-81(-81~+55 bp)有明显的绿色荧光蛋白表达,而pEGFP-47(-47~+55 bp)和空载体pEGFP-1未见表达.因此-81~-47 bp区域含有阴道毛滴虫LAG1基因转录所必需的基本启动子序列.
本研究旨在剋隆併分析陰道毛滴蟲LAG1基因啟動子,為進一步研究在細胞衰老過程中LAG1基因的轉錄調控提供實驗資料.預測啟動子所在區域,用PCR技術擴增啟動子區序列,併分彆剋隆入熒光素酶報告基因載體pGL3-Basic及增彊型綠色熒光蛋白報告基因載體pEGFP-1,用脂質體介導的方法瞬時轉染EC109細胞,然後測定熒光素酶錶達活性及觀察綠色熒光蛋白的錶達情況.結果錶明在構建的6種熒光素酶報告基因錶達體繫及2種增彊型綠色熒光蛋白報告基因錶達體繫中,錶達載體pGL3-455(-455~+55 bp)、pGL3-417(-417~+55 bp)、pGL3-280(-280~+55 bp)、pGL3-202(-202~+55 bp)、pGt3-81(-81~+55 bp)的熒光素酶錶達活性相近,均明顯高于錶達載體pGL347(-47~+55 bp)熒光素酶錶達活性,而pGL3-47錶達載體熒光素酶錶達活性極低,與陰性對照活性相近,提示-47~+55 bp區無啟動子活性.綠色熒光蛋白的錶達情況也類似,pEGFP-81(-81~+55 bp)有明顯的綠色熒光蛋白錶達,而pEGFP-47(-47~+55 bp)和空載體pEGFP-1未見錶達.因此-81~-47 bp區域含有陰道毛滴蟲LAG1基因轉錄所必需的基本啟動子序列.
본연구지재극륭병분석음도모적충LAG1기인계동자,위진일보연구재세포쇠로과정중LAG1기인적전록조공제공실험자료.예측계동자소재구역,용PCR기술확증계동자구서렬,병분별극륭입형광소매보고기인재체pGL3-Basic급증강형록색형광단백보고기인재체pEGFP-1,용지질체개도적방법순시전염EC109세포,연후측정형광소매표체활성급관찰록색형광단백적표체정황.결과표명재구건적6충형광소매보고기인표체체계급2충증강형록색형광단백보고기인표체체계중,표체재체pGL3-455(-455~+55 bp)、pGL3-417(-417~+55 bp)、pGL3-280(-280~+55 bp)、pGL3-202(-202~+55 bp)、pGt3-81(-81~+55 bp)적형광소매표체활성상근,균명현고우표체재체pGL347(-47~+55 bp)형광소매표체활성,이pGL3-47표체재체형광소매표체활성겁저,여음성대조활성상근,제시-47~+55 bp구무계동자활성.록색형광단백적표체정황야유사,pEGFP-81(-81~+55 bp)유명현적록색형광단백표체,이pEGFP-47(-47~+55 bp)화공재체pEGFP-1미견표체.인차-81~-47 bp구역함유음도모적충LAG1기인전록소필수적기본계동자서렬.