CAJ | 학술논문

本研究旨在克隆并分析阴道毛滴虫LAG1基因启动子,为进一步研究在细胞衰老过程中LAG1基因的转录调控提供实验资料.预测启动子所在区域,用PCR技术扩增启动子区序列,并分别克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic及增强型绿色荧光蛋白报告基因载体pEGFP-1,用脂质体介导的方法瞬时转染EC109细胞,然后测定荧光素酶表达活性及观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果表明在构建的6种荧光素酶报告基因表达体系及2种增强型绿色荧光蛋白报告基因表达体系中,表达载体pGL3-455(-455～+55 bp)、pGL3-417(-417～+55 bp)、pGL3-280(-280～+55 bp)、pGL3-202(-202～+55 bp)、pGt3-81(-81～+55 bp)的荧光素酶表达活性相近,均明显高于表达载体pGL347(-47～+55 bp)荧光素酶表达活性,而pGL3-47表达载体荧光素酶表达活性极低,与阴性对照活性相近,提示-47～+55 bp区无启动子活性.绿色荧光蛋白的表达情况也类似,pEGFP-81(-81～+55 bp)有明显的绿色荧光蛋白表达,而pEGFP-47(-47～+55 bp)和空载体pEGFP-1未见表达.因此-81～-47 bp区域含有阴道毛滴虫LAG1基因转录所必需的基本启动子序列.
본연구지재극륭병분석음도모적충LAG1기인계동자,위진일보연구재세포쇠로과정중LAG1기인적전록조공제공실험자료.예측계동자소재구역,용PCR기술확증계동자구서렬,병분별극륭입형광소매보고기인재체pGL3-Basic급증강형록색형광단백보고기인재체pEGFP-1,용지질체개도적방법순시전염EC109세포,연후측정형광소매표체활성급관찰록색형광단백적표체정황.결과표명재구건적6충형광소매보고기인표체체계급2충증강형록색형광단백보고기인표체체계중,표체재체pGL3-455(-455～+55 bp)、pGL3-417(-417～+55 bp)、pGL3-280(-280～+55 bp)、pGL3-202(-202～+55 bp)、pGt3-81(-81～+55 bp)적형광소매표체활성상근,균명현고우표체재체pGL347(-47～+55 bp)형광소매표체활성,이pGL3-47표체재체형광소매표체활성겁저,여음성대조활성상근,제시-47～+55 bp구무계동자활성.록색형광단백적표체정황야유사,pEGFP-81(-81～+55 bp)유명현적록색형광단백표체,이pEGFP-47(-47～+55 bp)화공재체pEGFP-1미견표체.인차-81～-47 bp구역함유음도모적충LAG1기인전록소필수적기본계동자서렬.