广西农业生物科学
廣西農業生物科學
엄서농업생물과학
JOURNAL OF GUANGXI AGRICULTURAL AND BIOLOGICAL SCIENCE
2008年
4期
325-328,387
,共5页
王钦%李辉%张磊%覃琦丽%薛林涛%滕维中%石德顺
王欽%李輝%張磊%覃琦麗%薛林濤%滕維中%石德順
왕흠%리휘%장뢰%담기려%설림도%등유중%석덕순
成骨细胞%分离培养%鉴定%碱性磷酸酶%小鼠
成骨細胞%分離培養%鑒定%堿性燐痠酶%小鼠
성골세포%분리배양%감정%감성린산매%소서
对小鼠成骨细胞的体外分离培养方法进行了摸索,并对其生物学特性进行了鉴定.手术法分离新生小鼠颅骨骨片,用0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)预消化20~30 min,而后用0.08%胶原酶+0.05%胰蛋白酶+0.004%EDTA的复合酶多次消化(每次10 min)收集细胞,然后接种于细胞培养瓶中进行培养,并通过苏木精-伊红(HE)染色、BCIP/NBT Kit碱性磷酸酶(ALP)染色、Von Kossa法钙结节染色和四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法对培养细胞进行生物学鉴定.结果发现,分离得到的细胞92%为存活细胞,差速贴壁培养后可筛选得到高纯度的成骨细胞,原代培养8 d后可形成单层细胞,传代培养6～7 d后可形成单层细胞.这些细胞有ALP活性,并具有体外钙化能力.结果表明,本研究建立的小鼠成骨细胞分离培养与鉴定方法是可行的.
對小鼠成骨細胞的體外分離培養方法進行瞭摸索,併對其生物學特性進行瞭鑒定.手術法分離新生小鼠顱骨骨片,用0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙痠(EDTA)預消化20~30 min,而後用0.08%膠原酶+0.05%胰蛋白酶+0.004%EDTA的複閤酶多次消化(每次10 min)收集細胞,然後接種于細胞培養瓶中進行培養,併通過囌木精-伊紅(HE)染色、BCIP/NBT Kit堿性燐痠酶(ALP)染色、Von Kossa法鈣結節染色和四甲基偶氮唑鹽(MTT)微量酶反應比色法對培養細胞進行生物學鑒定.結果髮現,分離得到的細胞92%為存活細胞,差速貼壁培養後可篩選得到高純度的成骨細胞,原代培養8 d後可形成單層細胞,傳代培養6～7 d後可形成單層細胞.這些細胞有ALP活性,併具有體外鈣化能力.結果錶明,本研究建立的小鼠成骨細胞分離培養與鑒定方法是可行的.
대소서성골세포적체외분리배양방법진행료모색,병대기생물학특성진행료감정.수술법분리신생소서로골골편,용0.25%이단백매+0.02%을이알사을산(EDTA)예소화20~30 min,이후용0.08%효원매+0.05%이단백매+0.004%EDTA적복합매다차소화(매차10 min)수집세포,연후접충우세포배양병중진행배양,병통과소목정-이홍(HE)염색、BCIP/NBT Kit감성린산매(ALP)염색、Von Kossa법개결절염색화사갑기우담서염(MTT)미량매반응비색법대배양세포진행생물학감정.결과발현,분리득도적세포92%위존활세포,차속첩벽배양후가사선득도고순도적성골세포,원대배양8 d후가형성단층세포,전대배양6～7 d후가형성단층세포.저사세포유ALP활성,병구유체외개화능력.결과표명,본연구건립적소서성골세포분리배양여감정방법시가행적.
