中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2011年
2期
108-111
,共4页
黄元%向华%陈晶%向蓉%张健騑%宣华
黃元%嚮華%陳晶%嚮蓉%張健騑%宣華
황원%향화%진정%향용%장건비%선화
狂犬病病毒%RT-LAMP%检测
狂犬病病毒%RT-LAMP%檢測
광견병병독%RT-LAMP%검측
目的 建立RT-LAMP方法,实现对狂犬病病毒核酸的快速、灵敏、简便的检测.方法 针对狂犬病病毒的核衣壳蛋白基因(N基因)和大转录酶蛋白基因(L基因)中的高度保守区段分别设计了一套引物,建立了检测狂犬病病毒的快速一步式反转录～环介导恒温扩增(RT-LAMP)方法.样品提取总RNA后,加入BstDNA聚合酶、各种反应成分,于63℃恒温水浴箱中放置60min,80℃5min终止反应,加入荧光染料SYBR GREEN I,根据颜色变化肉眼判定结果.结果 两套引物对狂犬病病毒RNA进行RT-LAMP检测,均有良好的特异性,灵敏度均比RT-巢式PCR高10倍以上.结论 该方法简单、快速,不需电泳,利用染色剂肉眼判定结果,不需要大型仪器,能在70min内完成对狂犬病病毒RNA的检测,适用于可疑动物的快速检测,尤其适合基层使用.
目的 建立RT-LAMP方法,實現對狂犬病病毒覈痠的快速、靈敏、簡便的檢測.方法 針對狂犬病病毒的覈衣殼蛋白基因(N基因)和大轉錄酶蛋白基因(L基因)中的高度保守區段分彆設計瞭一套引物,建立瞭檢測狂犬病病毒的快速一步式反轉錄～環介導恆溫擴增(RT-LAMP)方法.樣品提取總RNA後,加入BstDNA聚閤酶、各種反應成分,于63℃恆溫水浴箱中放置60min,80℃5min終止反應,加入熒光染料SYBR GREEN I,根據顏色變化肉眼判定結果.結果 兩套引物對狂犬病病毒RNA進行RT-LAMP檢測,均有良好的特異性,靈敏度均比RT-巢式PCR高10倍以上.結論 該方法簡單、快速,不需電泳,利用染色劑肉眼判定結果,不需要大型儀器,能在70min內完成對狂犬病病毒RNA的檢測,適用于可疑動物的快速檢測,尤其適閤基層使用.
목적 건립RT-LAMP방법,실현대광견병병독핵산적쾌속、령민、간편적검측.방법 침대광견병병독적핵의각단백기인(N기인)화대전록매단백기인(L기인)중적고도보수구단분별설계료일투인물,건립료검측광견병병독적쾌속일보식반전록～배개도항온확증(RT-LAMP)방법.양품제취총RNA후,가입BstDNA취합매、각충반응성분,우63℃항온수욕상중방치60min,80℃5min종지반응,가입형광염료SYBR GREEN I,근거안색변화육안판정결과.결과 량투인물대광견병병독RNA진행RT-LAMP검측,균유량호적특이성,령민도균비RT-소식PCR고10배이상.결론 해방법간단、쾌속,불수전영,이용염색제육안판정결과,불수요대형의기,능재70min내완성대광견병병독RNA적검측,괄용우가의동물적쾌속검측,우기괄합기층사용.
