暨南大学学报（自然科学与医学版）
暨南大學學報（自然科學與醫學版）
기남대학학보（자연과학여의학판）
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）
2011年
4期
383-386
,共4页
强力霉素%转染%诱导表达调控%RAW264.7细胞株
彊力黴素%轉染%誘導錶達調控%RAW264.7細胞株
강력매소%전염%유도표체조공%RAW264.7세포주
目的:利用Tet-lon诱导表达调控系统构建可以用强力霉素调控表达的RAW264.7 Tet-lon细胞株,探讨目的基因NF-kB的作用.方法:将调控质粒pCDNA6/TR转染RAW264.7细胞,经潮霉素筛选得到稳定单克隆.单克隆扩大培养后,转染pCDNA4/TO/lacZ质粒,再经过强力霉素诱导表达,检测β-半乳糖苷酶(β-gal)活性,筛选出受强力霉素调控的高诱导水平、低背景表达的RAW264.7 Tet-on细胞株.结果:成功建立一株受强力霉素调控的高诱导水平、低背景表达的细胞株RAW264.7 Tet-on 3,并且强力霉素对下游基因β-gal的诱导效果具有浓度和时间依赖性,强力霉素的最佳诱导时间为24h,强力霉素的最佳诱导质量浓度为1μg/mL.结论:已获得受强力霉素调控的细胞株.
目的:利用Tet-lon誘導錶達調控繫統構建可以用彊力黴素調控錶達的RAW264.7 Tet-lon細胞株,探討目的基因NF-kB的作用.方法:將調控質粒pCDNA6/TR轉染RAW264.7細胞,經潮黴素篩選得到穩定單剋隆.單剋隆擴大培養後,轉染pCDNA4/TO/lacZ質粒,再經過彊力黴素誘導錶達,檢測β-半乳糖苷酶(β-gal)活性,篩選齣受彊力黴素調控的高誘導水平、低揹景錶達的RAW264.7 Tet-on細胞株.結果:成功建立一株受彊力黴素調控的高誘導水平、低揹景錶達的細胞株RAW264.7 Tet-on 3,併且彊力黴素對下遊基因β-gal的誘導效果具有濃度和時間依賴性,彊力黴素的最佳誘導時間為24h,彊力黴素的最佳誘導質量濃度為1μg/mL.結論:已穫得受彊力黴素調控的細胞株.
목적:이용Tet-lon유도표체조공계통구건가이용강력매소조공표체적RAW264.7 Tet-lon세포주,탐토목적기인NF-kB적작용.방법:장조공질립pCDNA6/TR전염RAW264.7세포,경조매소사선득도은정단극륭.단극륭확대배양후,전염pCDNA4/TO/lacZ질립,재경과강력매소유도표체,검측β-반유당감매(β-gal)활성,사선출수강력매소조공적고유도수평、저배경표체적RAW264.7 Tet-on세포주.결과:성공건립일주수강력매소조공적고유도수평、저배경표체적세포주RAW264.7 Tet-on 3,병차강력매소대하유기인β-gal적유도효과구유농도화시간의뢰성,강력매소적최가유도시간위24h,강력매소적최가유도질량농도위1μg/mL.결론:이획득수강력매소조공적세포주.
