江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
1期
54-57
,共4页
韦传宝%李亚楠%华俊雅%张灿灿%张业峰
韋傳寶%李亞楠%華俊雅%張燦燦%張業峰
위전보%리아남%화준아%장찬찬%장업봉
大蒜B病毒%外壳蛋白(CP)基因%原核表达%抗血清制备
大蒜B病毒%外殼蛋白(CP)基因%原覈錶達%抗血清製備
대산B병독%외각단백(CP)기인%원핵표체%항혈청제비
制备抗大蒜B病毒(Garlic virus B,GarV-B) CP血清,为研究侵染大蒜6种葱X病毒属(Allexivirus)病毒之间的血清学关系以及大田检测GarV-B奠定基础.该研究根据GenBank报道的GarV-B序列设计引物,扩增从六安市寿县分离获得的GarV-B外壳蛋白基因(CP)并进行序列比对分析.将GarV-B的CP基因插入表达载体pS-BET,在大肠杆菌BL21( DE3) plys E菌株中诱导表达.表达的CP经12％ SDS-PAGE和5％～ 20％梯度SDS-PAGE两次制备电泳纯化,免疫小鼠获得抗CP血清.Western blot分析抗体的特异性,采用ELISA分析抗体能否与天然GarV-B病毒结合.结果显示:GarV-B的CP基因与目前已报道的GarV-B不同分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89％～ 90％,氨基酸序列同源性为92％ ～ 93％.表明制备的抗体对GarV-B的CP具有高度特异性,且能够与天然GarV-B病毒粒子结合.因此本研究制备的抗GarV-B的CP血清可以用于该病毒的检测.
製備抗大蒜B病毒(Garlic virus B,GarV-B) CP血清,為研究侵染大蒜6種蔥X病毒屬(Allexivirus)病毒之間的血清學關繫以及大田檢測GarV-B奠定基礎.該研究根據GenBank報道的GarV-B序列設計引物,擴增從六安市壽縣分離穫得的GarV-B外殼蛋白基因(CP)併進行序列比對分析.將GarV-B的CP基因插入錶達載體pS-BET,在大腸桿菌BL21( DE3) plys E菌株中誘導錶達.錶達的CP經12％ SDS-PAGE和5％～ 20％梯度SDS-PAGE兩次製備電泳純化,免疫小鼠穫得抗CP血清.Western blot分析抗體的特異性,採用ELISA分析抗體能否與天然GarV-B病毒結閤.結果顯示:GarV-B的CP基因與目前已報道的GarV-B不同分離物CP基因覈苷痠序列的同源性為89％～ 90％,氨基痠序列同源性為92％ ～ 93％.錶明製備的抗體對GarV-B的CP具有高度特異性,且能夠與天然GarV-B病毒粒子結閤.因此本研究製備的抗GarV-B的CP血清可以用于該病毒的檢測.
제비항대산B병독(Garlic virus B,GarV-B) CP혈청,위연구침염대산6충총X병독속(Allexivirus)병독지간적혈청학관계이급대전검측GarV-B전정기출.해연구근거GenBank보도적GarV-B서렬설계인물,확증종륙안시수현분리획득적GarV-B외각단백기인(CP)병진행서렬비대분석.장GarV-B적CP기인삽입표체재체pS-BET,재대장간균BL21( DE3) plys E균주중유도표체.표체적CP경12％ SDS-PAGE화5％～ 20％제도SDS-PAGE량차제비전영순화,면역소서획득항CP혈청.Western blot분석항체적특이성,채용ELISA분석항체능부여천연GarV-B병독결합.결과현시:GarV-B적CP기인여목전이보도적GarV-B불동분리물CP기인핵감산서렬적동원성위89％～ 90％,안기산서렬동원성위92％ ～ 93％.표명제비적항체대GarV-B적CP구유고도특이성,차능구여천연GarV-B병독입자결합.인차본연구제비적항GarV-B적CP혈청가이용우해병독적검측.
