食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2011年
2期
267-272
,共6页
李倩%徐美娟%夏海锋%饶志明
李倩%徐美娟%夏海鋒%饒誌明
리천%서미연%하해봉%요지명
大肠杆菌%克隆表达%苹果酸脱氢酶%纯化%酶学性质
大腸桿菌%剋隆錶達%蘋果痠脫氫酶%純化%酶學性質
대장간균%극륭표체%평과산탈경매%순화%매학성질
以大肠杆菌基因组DNA为模板,扩增得到苹果酸脱氢酶(mdh)编码基因mdh,构建了重组菌pET-28a-mdh/BL21并成功表达了mdh,大小约36 000.选用Ni柱亲和层析法纯化具有活性的苹果酸脱氢酶(mdh),纯化后比酶活达到112.5 U/mg,纯化倍数达2.62倍,回收率为59%.并对该酶的酶学性质进行了初步研究,其中反应最适PH值为6.0,在PH值2.0～6.0范围内稳定;反应最适温度为37℃,在42℃以下酶的稳定性较好.K+对酶有明显的激活作用,Cu2+对酶有抑制作用,Hg2+和Zn2+对酶有很强的抑制作用.醇类对酶的活力影响不大,丙三醇可显著提高酶的热稳定性.酶动力学参数以草酰乙酸为底物的Km为0.235 mmol/L,Vmax为0.47 μmol/(L·min).
以大腸桿菌基因組DNA為模闆,擴增得到蘋果痠脫氫酶(mdh)編碼基因mdh,構建瞭重組菌pET-28a-mdh/BL21併成功錶達瞭mdh,大小約36 000.選用Ni柱親和層析法純化具有活性的蘋果痠脫氫酶(mdh),純化後比酶活達到112.5 U/mg,純化倍數達2.62倍,迴收率為59%.併對該酶的酶學性質進行瞭初步研究,其中反應最適PH值為6.0,在PH值2.0～6.0範圍內穩定;反應最適溫度為37℃,在42℃以下酶的穩定性較好.K+對酶有明顯的激活作用,Cu2+對酶有抑製作用,Hg2+和Zn2+對酶有很彊的抑製作用.醇類對酶的活力影響不大,丙三醇可顯著提高酶的熱穩定性.酶動力學參數以草酰乙痠為底物的Km為0.235 mmol/L,Vmax為0.47 μmol/(L·min).
이대장간균기인조DNA위모판,확증득도평과산탈경매(mdh)편마기인mdh,구건료중조균pET-28a-mdh/BL21병성공표체료mdh,대소약36 000.선용Ni주친화층석법순화구유활성적평과산탈경매(mdh),순화후비매활체도112.5 U/mg,순화배수체2.62배,회수솔위59%.병대해매적매학성질진행료초보연구,기중반응최괄PH치위6.0,재PH치2.0～6.0범위내은정;반응최괄온도위37℃,재42℃이하매적은정성교호.K+대매유명현적격활작용,Cu2+대매유억제작용,Hg2+화Zn2+대매유흔강적억제작용.순류대매적활력영향불대,병삼순가현저제고매적열은정성.매동역학삼수이초선을산위저물적Km위0.235 mmol/L,Vmax위0.47 μmol/(L·min).
