生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
6期
968-972
,共5页
张道永%杨爽%吕树军%闫继东%朱天慧
張道永%楊爽%呂樹軍%閆繼東%硃天慧
장도영%양상%려수군%염계동%주천혜
人骨形态发生蛋白2%CHO%共转染%C2C12%碱性磷酸酶
人骨形態髮生蛋白2%CHO%共轉染%C2C12%堿性燐痠酶
인골형태발생단백2%CHO%공전염%C2C12%감성린산매
构建真核表达载体pCDNA3.1(+)-hBMP-2,与质粒pSV2-dhfr共转染CHO-dhfr-细胞,以含有700μg/mL G418的IMDM进行选择性培养,筛选抗性克隆,并用MTX扩增,提高rhBMP-2的表达量.收集的rhBMP-2蛋白进行Western blot检测,还原蛋白样品电泳产生一条大小约为18kD的特异性条带,非还原蛋白样品电泳产生一条大小约为30kD的特异性条带,提示表达的rhBMP-2是经过糖基化修饰的,且以同源二聚体形式分泌表达.单细胞分离培养得到14株rCHO(hBMP-2)单克隆细胞株,ELISA法检测rhBMP-2表达水平,最高可达7.83μg/24h/106cells.活性分析结果表明,表达的rhBMP-2具有很强的生物学活性.
構建真覈錶達載體pCDNA3.1(+)-hBMP-2,與質粒pSV2-dhfr共轉染CHO-dhfr-細胞,以含有700μg/mL G418的IMDM進行選擇性培養,篩選抗性剋隆,併用MTX擴增,提高rhBMP-2的錶達量.收集的rhBMP-2蛋白進行Western blot檢測,還原蛋白樣品電泳產生一條大小約為18kD的特異性條帶,非還原蛋白樣品電泳產生一條大小約為30kD的特異性條帶,提示錶達的rhBMP-2是經過糖基化脩飾的,且以同源二聚體形式分泌錶達.單細胞分離培養得到14株rCHO(hBMP-2)單剋隆細胞株,ELISA法檢測rhBMP-2錶達水平,最高可達7.83μg/24h/106cells.活性分析結果錶明,錶達的rhBMP-2具有很彊的生物學活性.
구건진핵표체재체pCDNA3.1(+)-hBMP-2,여질립pSV2-dhfr공전염CHO-dhfr-세포,이함유700μg/mL G418적IMDM진행선택성배양,사선항성극륭,병용MTX확증,제고rhBMP-2적표체량.수집적rhBMP-2단백진행Western blot검측,환원단백양품전영산생일조대소약위18kD적특이성조대,비환원단백양품전영산생일조대소약위30kD적특이성조대,제시표체적rhBMP-2시경과당기화수식적,차이동원이취체형식분비표체.단세포분리배양득도14주rCHO(hBMP-2)단극륭세포주,ELISA법검측rhBMP-2표체수평,최고가체7.83μg/24h/106cells.활성분석결과표명,표체적rhBMP-2구유흔강적생물학활성.
