小鼠β防御素2、3融合基因载体构建及其抗流感病毒作用
소서β방어소2、3융합기인재체구건급기항류감병독작용
Expression of mBD2-mBD3 fusion gene in eukaryotic expression system and its activity of anti-influenza A virus
  • 万方数据
    西部医学 서부의학
    MEDICAL JOURNAL OF WEST CHINA
    2010年 3期 396-399 ,共4页

    张强%李明远%丰锋%巩天祥%李婉宜%刘冯欢%冯艳%邝玉%王保宁

    장강%리명원%봉봉%공천상%리완의%류풍환%풍염%광옥%왕보저

    β防御素%甲型流感病毒%融合基因%重叠延伸PCR%免疫荧光 β防禦素%甲型流感病毒%融閤基因%重疊延伸PCR%免疫熒光
    β방어소%갑형류감병독%융합기인%중첩연신PCR%면역형광
    目的 构建mBD2与mBD3融合基因的真核表达栽体,检测其在MDCK细胞中的表达情况,并探讨其抗病毒特性.方法 利用PCR方法分别扩增mBD2与mBD3基因片段,通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将mBD2与mBD3通过一段多肽接头Gly4Ser连接为融合基因mBD2与mBD3.将该融合基因插入真核表达栽体pcDNA3.1(+)获得重组质粒pcDNA3.1(+)/mBD2-mBD3,经酶切、PCR及测序鉴定正确后.用脂质体转染MDCK细胞,通过免疫荧光检测融合蛋白表达情况,最后采用CCID50测定并分析抗流感病毒作用.结果 经鉴定后证实,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2-mBD3正确,该重组质粒能在MDCK细胞中稳定表达,CCID50实验结果说明有较好的抗流感活性.结论 本研究成功构建mBD2-mBD3融合基因的真核表达质粒,并证实其融合蛋白能在MDCK细胞中稳定表达,该结果为进一步研究防御素抗病毒机制奠定了坚实的基础.
    목적 구건mBD2여mBD3융합기인적진핵표체재체,검측기재MDCK세포중적표체정황,병탐토기항병독특성.방법 이용PCR방법분별확증mBD2여mBD3기인편단,통과중첩연신PCR기술(SOE-PCR)장mBD2여mBD3통과일단다태접두Gly4Ser련접위융합기인mBD2여mBD3.장해융합기인삽입진핵표체재체pcDNA3.1(+)획득중조질립pcDNA3.1(+)/mBD2-mBD3,경매절、PCR급측서감정정학후.용지질체전염MDCK세포,통과면역형광검측융합단백표체정황,최후채용CCID50측정병분석항류감병독작용.결과 경감정후증실,구건진핵표체질립pcDNA3.1(+)/mBD2-mBD3정학,해중조질립능재MDCK세포중은정표체,CCID50실험결과설명유교호적항류감활성.결론 본연구성공구건mBD2-mBD3융합기인적진핵표체질립,병증실기융합단백능재MDCK세포중은정표체,해결과위진일보연구방어소항병독궤제전정료견실적기출.
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