CAJ | 학술논문

目的:制备重组创伤弧菌溶细胞素(recombinant Vibrio vulnificus cytolysin,rVVC)鼠源性单克隆抗体,并对其特异性及免疫球蛋白类型进行鉴定,为创伤弧菌溶细胞素( Vibrio vulnificus cytolysin,VVC)致病机制的后续研究及创伤弧菌引起的食品污染中溶细胞毒素快速检测试剂盒的研发奠定基础.方法:IPTG诱导含pET28a(+)-vvhA的大肠杆菌表达rVVC,将rVVC纯化、复性后经甲醛脱毒作为抗原免疫BALB/c小鼠.SDS-PAGE检测蛋白纯化后效果.采用杂交瘤技术和ELISA法制备并筛选分泌rVVC 单克隆抗体的杂交瘤细胞株,有限稀释法对阳性孔克隆化培养.采用免疫双扩法鉴定单克隆抗体类型, ELISA法、免疫双扩法鉴定单克隆抗体的特异性.结果:将纯化复性后的rVVC作为抗原免疫小鼠后,经 ELISA检测,血清有效稀释度达1:12800.共获得2株可持续分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为B2C7 和E3F4株,其抗体类型均为IgG1,且具有较高特异性,与多种其他细菌蛋白不发生免疫反应.结论:本研究成功免疫BALB/c小鼠,获得B2C7和E3F4两株可持续稳定分泌rVVC鼠源性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体类型为IgG1型.
목적:제비중조창상호균용세포소(recombinant Vibrio vulnificus cytolysin,rVVC)서원성단극륭항체,병대기특이성급면역구단백류형진행감정,위창상호균용세포소( Vibrio vulnificus cytolysin,VVC)치병궤제적후속연구급창상호균인기적식품오염중용세포독소쾌속검측시제합적연발전정기출.방법:IPTG유도함pET28a(+)-vvhA적대장간균표체rVVC,장rVVC순화、복성후경갑철탈독작위항원면역BALB/c소서.SDS-PAGE검측단백순화후효과.채용잡교류기술화ELISA법제비병사선분비rVVC 단극륭항체적잡교류세포주,유한희석법대양성공극륭화배양.채용면역쌍확법감정단극륭항체류형, ELISA법、면역쌍확법감정단극륭항체적특이성.결과:장순화복성후적rVVC작위항원면역소서후,경 ELISA검측,혈청유효희석도체1:12800.공획득2주가지속분비단극륭항체적잡교류세포주,분별위B2C7 화E3F4주,기항체류형균위IgG1,차구유교고특이성,여다충기타세균단백불발생면역반응.결론:본연구성공면역BALB/c소서,획득B2C7화E3F4량주가지속은정분비rVVC서원성단극륭항체적잡교류세포주,항체류형위IgG1형.