中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2010年
12期
1110-1113
,共4页
汪家旭%黄建炜%叶曦%李国伟%牛建军
汪傢旭%黃建煒%葉晞%李國偉%牛建軍
왕가욱%황건위%협희%리국위%우건군
美洲钩虫%rDNA ITS-2序列%荧光定量PCR%SYBR Green I
美洲鉤蟲%rDNA ITS-2序列%熒光定量PCR%SYBR Green I
미주구충%rDNA ITS-2서렬%형광정량PCR%SYBR Green I
目的 建立荧光定量PCR检测美洲钩虫的方法.方法 提取虫体基因组DNA、根据GenBank中美洲钩虫ITS-2序列设计特异引物,PCR扩增ITS-2序列、克隆、测序和比对.常规PCR检验引物特异性.将ITS-2序列扩增产物回收、纯化后经T克隆转入大肠埃希菌DH5α,提取重组质粒,鉴定后作为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,并做灵敏性和重复性试验.结果 构建的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线的吸收峰单一,实验重复性良好.结论 成功构建了SYBR Green I荧光定量PCR检测美洲钩虫的方法,可用于快速、准确、定量检测美洲钩虫.
目的 建立熒光定量PCR檢測美洲鉤蟲的方法.方法 提取蟲體基因組DNA、根據GenBank中美洲鉤蟲ITS-2序列設計特異引物,PCR擴增ITS-2序列、剋隆、測序和比對.常規PCR檢驗引物特異性.將ITS-2序列擴增產物迴收、純化後經T剋隆轉入大腸埃希菌DH5α,提取重組質粒,鑒定後作為標準品模闆建立熒光定量PCR標準麯線,併做靈敏性和重複性試驗.結果 構建的熒光定量PCR標準麯線循環閾值與模闆濃度呈良好的線性關繫,溶解麯線的吸收峰單一,實驗重複性良好.結論 成功構建瞭SYBR Green I熒光定量PCR檢測美洲鉤蟲的方法,可用于快速、準確、定量檢測美洲鉤蟲.
목적 건립형광정량PCR검측미주구충적방법.방법 제취충체기인조DNA、근거GenBank중미주구충ITS-2서렬설계특이인물,PCR확증ITS-2서렬、극륭、측서화비대.상규PCR검험인물특이성.장ITS-2서렬확증산물회수、순화후경T극륭전입대장애희균DH5α,제취중조질립,감정후작위표준품모판건립형광정량PCR표준곡선,병주령민성화중복성시험.결과 구건적형광정량PCR표준곡선순배역치여모판농도정량호적선성관계,용해곡선적흡수봉단일,실험중복성량호.결론 성공구건료SYBR Green I형광정량PCR검측미주구충적방법,가용우쾌속、준학、정량검측미주구충.
