河南师范大学学报（自然科学版）
河南師範大學學報（自然科學版）
하남사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HENAN NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2012年
2期
132-136
,共5页
胡岩岩%李玉会%白雪%陈百宝%刘鸣宇%李芬
鬍巖巖%李玉會%白雪%陳百寶%劉鳴宇%李芬
호암암%리옥회%백설%진백보%류명우%리분
Elp3%毕赤酵母%分泌表达%活性测定
Elp3%畢赤酵母%分泌錶達%活性測定
Elp3%필적효모%분비표체%활성측정
人Elp3蛋白(human Elongator protein 3,hElp3)是组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltranferase,HAT) Elongator复合物的催化亚基.可参与组蛋白乙酰化修饰与基因转录延伸,其功能异常与人类多种疾病相关.目前对其羧基末端高度保守的第二功能域研究较少.以pYES2hElp3质粒为模板,PCR获hElp3基因全长,插入改造的毕赤酵母表达载体pPIC9KH,转化巴斯德毕赤酵母菌GS115菌株.经表型鉴定、PCR分析和G418筛选得到Mut+型多拷贝整合菌.0.5％的甲醇诱导hElp3高效分泌表达,Ni-NTA纯化及Western印迹证实获目的蛋白.OPA法测得其拥有良好的HAT活性,为体外测定其第二结构域是否拥有催化活性奠定了基础,对筛选抑制其HAT活性的小分子药物用于疾病治疗研究至关重要.
人Elp3蛋白(human Elongator protein 3,hElp3)是組蛋白乙酰轉移酶(Histone acetyltranferase,HAT) Elongator複閤物的催化亞基.可參與組蛋白乙酰化脩飾與基因轉錄延伸,其功能異常與人類多種疾病相關.目前對其羧基末耑高度保守的第二功能域研究較少.以pYES2hElp3質粒為模闆,PCR穫hElp3基因全長,插入改造的畢赤酵母錶達載體pPIC9KH,轉化巴斯德畢赤酵母菌GS115菌株.經錶型鑒定、PCR分析和G418篩選得到Mut+型多拷貝整閤菌.0.5％的甲醇誘導hElp3高效分泌錶達,Ni-NTA純化及Western印跡證實穫目的蛋白.OPA法測得其擁有良好的HAT活性,為體外測定其第二結構域是否擁有催化活性奠定瞭基礎,對篩選抑製其HAT活性的小分子藥物用于疾病治療研究至關重要.
인Elp3단백(human Elongator protein 3,hElp3)시조단백을선전이매(Histone acetyltranferase,HAT) Elongator복합물적최화아기.가삼여조단백을선화수식여기인전록연신,기공능이상여인류다충질병상관.목전대기최기말단고도보수적제이공능역연구교소.이pYES2hElp3질립위모판,PCR획hElp3기인전장,삽입개조적필적효모표체재체pPIC9KH,전화파사덕필적효모균GS115균주.경표형감정、PCR분석화G418사선득도Mut+형다고패정합균.0.5％적갑순유도hElp3고효분비표체,Ni-NTA순화급Western인적증실획목적단백.OPA법측득기옹유량호적HAT활성,위체외측정기제이결구역시부옹유최화활성전정료기출,대사선억제기HAT활성적소분자약물용우질병치료연구지관중요.
