中国油料作物学报
中國油料作物學報
중국유료작물학보
CHINESE JOURNAL OF OIL CROP SCIENCES
2006年
3期
251-256
,共6页
陈松%张杰夫%陈峰%陈新军%龙卫华%浦惠明%戚存扣
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진송%장걸부%진봉%진신군%룡위화%포혜명%척존구
甘蓝型油菜%fad2基因%ihpRNA表达载体
甘藍型油菜%fad2基因%ihpRNA錶達載體
감람형유채%fad2기인%ihpRNA표체재체
旨在通过转基因途径诱导油菜种子中fad2基因发生转录后基因沉默,本文构建了fad2基因的ihpRNA植物表达载体.通过PCR扩增分离到甘蓝型油菜种子特异性表达的Napin启动子序列(1147bp)以及油酸脱饱和酶基因(fad2)的一个537bp的片段,并将它们分别克隆到pGEM-T easy载体中.利用中间载体pHurrican构建fad2基因的反向重复框.将fad2基因片段以正向的方式连接在一个可剪切的内含子的5'末端,而以反向的方式连接到该内含子的3'末端;然后将Napin启动子序列连接到该反向重复框的5'端,而在其3'端接有一个nos终止子序列;最后将fad2基因的反向重复表达框分两步克隆到植物双元载体pCAMBIA2300的pUC18多克隆位点,构建具有种子特异性表达的fad2基因的ihpRNA表达载体pCNFIRnos.限制性内切酶酶切对载体作了鉴定分析.
旨在通過轉基因途徑誘導油菜種子中fad2基因髮生轉錄後基因沉默,本文構建瞭fad2基因的ihpRNA植物錶達載體.通過PCR擴增分離到甘藍型油菜種子特異性錶達的Napin啟動子序列(1147bp)以及油痠脫飽和酶基因(fad2)的一箇537bp的片段,併將它們分彆剋隆到pGEM-T easy載體中.利用中間載體pHurrican構建fad2基因的反嚮重複框.將fad2基因片段以正嚮的方式連接在一箇可剪切的內含子的5'末耑,而以反嚮的方式連接到該內含子的3'末耑;然後將Napin啟動子序列連接到該反嚮重複框的5'耑,而在其3'耑接有一箇nos終止子序列;最後將fad2基因的反嚮重複錶達框分兩步剋隆到植物雙元載體pCAMBIA2300的pUC18多剋隆位點,構建具有種子特異性錶達的fad2基因的ihpRNA錶達載體pCNFIRnos.限製性內切酶酶切對載體作瞭鑒定分析.
지재통과전기인도경유도유채충자중fad2기인발생전록후기인침묵,본문구건료fad2기인적ihpRNA식물표체재체.통과PCR확증분리도감람형유채충자특이성표체적Napin계동자서렬(1147bp)이급유산탈포화매기인(fad2)적일개537bp적편단,병장타문분별극륭도pGEM-T easy재체중.이용중간재체pHurrican구건fad2기인적반향중복광.장fad2기인편단이정향적방식련접재일개가전절적내함자적5'말단,이이반향적방식련접도해내함자적3'말단;연후장Napin계동자서렬련접도해반향중복광적5'단,이재기3'단접유일개nos종지자서렬;최후장fad2기인적반향중복표체광분량보극륭도식물쌍원재체pCAMBIA2300적pUC18다극륭위점,구건구유충자특이성표체적fad2기인적ihpRNA표체재체pCNFIRnos.한제성내절매매절대재체작료감정분석.
