现代生物医学进展
現代生物醫學進展
현대생물의학진전
PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE
2006年
10期
11-13
,共3页
张巨峰%韦芳%李惠明%黄陈%于慧%裘玮%黄倩
張巨峰%韋芳%李惠明%黃陳%于慧%裘瑋%黃倩
장거봉%위방%리혜명%황진%우혜%구위%황천
自杀基因%CD基因%载体构建%基因表达
自殺基因%CD基因%載體構建%基因錶達
자살기인%CD기인%재체구건%기인표체
目的:构建含自杀基因胞嘧啶脱氨酶(CD)的真核表达载体pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z-CD,并进行哺乳动物细胞HEK293转染研究.方法:以本实验室保存的含CD基因全长的质粒为模版,用PCR方法扩增CD基因阅读框序列,并定向克隆到带有HAtag的pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z载体上,使目的基因与HAtag在同一阅读框.重组体质粒经EcoRI和BamHI双酶切鉴定,并对插入的CD基因片段进行测序,将鉴定好的阳性重组质粒pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z-CD用脂质体介导转染HEK293,提取细胞蛋白,western blot检测CD基因的表达情况.结果:阳性重组质粒pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z CD经EcoRI和BamHI双酶切后,获得约为5.5kb片段和1.3kb插入片段,序列分析表明插入的片段与GenBank发布的序列一致,western blot检测到CD基因的表达.结论:成功构建了含自杀基因CD的真核表达质粒.
目的:構建含自殺基因胞嘧啶脫氨酶(CD)的真覈錶達載體pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z-CD,併進行哺乳動物細胞HEK293轉染研究.方法:以本實驗室保存的含CD基因全長的質粒為模版,用PCR方法擴增CD基因閱讀框序列,併定嚮剋隆到帶有HAtag的pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z載體上,使目的基因與HAtag在同一閱讀框.重組體質粒經EcoRI和BamHI雙酶切鑒定,併對插入的CD基因片段進行測序,將鑒定好的暘性重組質粒pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z-CD用脂質體介導轉染HEK293,提取細胞蛋白,western blot檢測CD基因的錶達情況.結果:暘性重組質粒pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z CD經EcoRI和BamHI雙酶切後,穫得約為5.5kb片段和1.3kb插入片段,序列分析錶明插入的片段與GenBank髮佈的序列一緻,western blot檢測到CD基因的錶達.結論:成功構建瞭含自殺基因CD的真覈錶達質粒.
목적:구건함자살기인포밀정탈안매(CD)적진핵표체재체pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z-CD,병진행포유동물세포HEK293전염연구.방법:이본실험실보존적함CD기인전장적질립위모판,용PCR방법확증CD기인열독광서렬,병정향극륭도대유HAtag적pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z재체상,사목적기인여HAtag재동일열독광.중조체질립경EcoRI화BamHI쌍매절감정,병대삽입적CD기인편단진행측서,장감정호적양성중조질립pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z-CD용지질체개도전염HEK293,제취세포단백,western blot검측CD기인적표체정황.결과:양성중조질립pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z CD경EcoRI화BamHI쌍매절후,획득약위5.5kb편단화1.3kb삽입편단,서렬분석표명삽입적편단여GenBank발포적서렬일치,western blot검측도CD기인적표체.결론:성공구건료함자살기인CD적진핵표체질립.
