组织工程与重建外科杂志
組織工程與重建外科雜誌
조직공정여중건외과잡지
JOURNAL OF TISSUE ENGINEERING AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2009年
1期
21-24
,共4页
郑江红%邓辰亮%丁志%茅广宇%杨松林
鄭江紅%鄧辰亮%丁誌%茅廣宇%楊鬆林
정강홍%산신량%정지%모엄우%양송림
细胞核因子1%转染%增生性瘢痕%成纤维细胞
細胞覈因子1%轉染%增生性瘢痕%成纖維細胞
세포핵인자1%전염%증생성반흔%성섬유세포
目的 探讨重组NF1基因转染人增生性瘢痕成纤维细胞的可行性,以及转染NF1基因对细胞增殖速率和Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响.方法 体外重组NF1基因,借助真核表达载体系统,转入体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞,通过激光共聚焦显微镜观察报告基因表达,并确定细胞转染效率.应用Real time PCR法比较转染前后NF1 mRNA及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达;采用CCK-8比色法,比较转染细胞与未转染细胞增殖状况.结果基因转染后,约50%的被转染细胞表达绿色荧光:NF1 mRNA在转染组、转染空载体组、未转染组细胞中的表达分别为:7.27±1.16、2.01±0.38、1.87±0.29,转染组NF1 mRNA相对表达量较未转染组和转染空载体组明显增高(P<0.01,n=5);Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA在转染组、转染空载体组、未转染组细胞中的表达分别为:3.01±0.48和2.05±0.25、0.89±0.18和0.94±0.16、0.99±0.11和0.92±0.19;转染组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA相对表达量较未转染组和转染空载体组均明显增高(P<0.01,n=5).结论 瘢痕成纤维细胞可作为NF1转染的靶细胞,NF1基因可能是导致瘢痕异常增生的重要基因.
目的 探討重組NF1基因轉染人增生性瘢痕成纖維細胞的可行性,以及轉染NF1基因對細胞增殖速率和Ⅰ、Ⅲ型膠原閤成的影響.方法 體外重組NF1基因,藉助真覈錶達載體繫統,轉入體外培養的人增生性瘢痕成纖維細胞,通過激光共聚焦顯微鏡觀察報告基因錶達,併確定細胞轉染效率.應用Real time PCR法比較轉染前後NF1 mRNA及Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA的錶達;採用CCK-8比色法,比較轉染細胞與未轉染細胞增殖狀況.結果基因轉染後,約50%的被轉染細胞錶達綠色熒光:NF1 mRNA在轉染組、轉染空載體組、未轉染組細胞中的錶達分彆為:7.27±1.16、2.01±0.38、1.87±0.29,轉染組NF1 mRNA相對錶達量較未轉染組和轉染空載體組明顯增高(P<0.01,n=5);Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA在轉染組、轉染空載體組、未轉染組細胞中的錶達分彆為:3.01±0.48和2.05±0.25、0.89±0.18和0.94±0.16、0.99±0.11和0.92±0.19;轉染組Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA相對錶達量較未轉染組和轉染空載體組均明顯增高(P<0.01,n=5).結論 瘢痕成纖維細胞可作為NF1轉染的靶細胞,NF1基因可能是導緻瘢痕異常增生的重要基因.
목적 탐토중조NF1기인전염인증생성반흔성섬유세포적가행성,이급전염NF1기인대세포증식속솔화Ⅰ、Ⅲ형효원합성적영향.방법 체외중조NF1기인,차조진핵표체재체계통,전입체외배양적인증생성반흔성섬유세포,통과격광공취초현미경관찰보고기인표체,병학정세포전염효솔.응용Real time PCR법비교전염전후NF1 mRNA급Ⅰ、Ⅲ형효원mRNA적표체;채용CCK-8비색법,비교전염세포여미전염세포증식상황.결과기인전염후,약50%적피전염세포표체록색형광:NF1 mRNA재전염조、전염공재체조、미전염조세포중적표체분별위:7.27±1.16、2.01±0.38、1.87±0.29,전염조NF1 mRNA상대표체량교미전염조화전염공재체조명현증고(P<0.01,n=5);Ⅰ、Ⅲ형효원mRNA재전염조、전염공재체조、미전염조세포중적표체분별위:3.01±0.48화2.05±0.25、0.89±0.18화0.94±0.16、0.99±0.11화0.92±0.19;전염조Ⅰ、Ⅲ형효원mRNA상대표체량교미전염조화전염공재체조균명현증고(P<0.01,n=5).결론 반흔성섬유세포가작위NF1전염적파세포,NF1기인가능시도치반흔이상증생적중요기인.
