徐州医学院学报
徐州醫學院學報
서주의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU
2010年
4期
219-222
,共4页
甘宜敏%孔凡运%史震%汤仁仙%郑葵阳
甘宜敏%孔凡運%史震%湯仁仙%鄭葵暘
감의민%공범운%사진%탕인선%정규양
APOBEC3G%克隆%真核表达载体
APOBEC3G%剋隆%真覈錶達載體
APOBEC3G%극륭%진핵표체재체
目的 克隆人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide 3G,APOBEC3G)基因cDNA,构建APOBEC3G基因的真核表达载体,并在体外进行表达和鉴定.方法 采用RT-PER技术从健康人外周血单个核细胞中克隆APOBEC3G基因,将该基因插入pcDNA3.1真核表达载体,构建pcDNA3.1-A3G真核表达质粒,并利用脂质体将重组质粒pcDNA3.1-A3G转染HepG2和HL7702细胞,经免疫细胞化学、Western blot等方法检测APOBEC3G真核表达情况.结果 双酶切鉴定和测序结果表明,APOBEC3G真核表达载体构建成功.免疫细胞化学和Western blot结果均显示,转染pcDNA3.1-A3G的HepG2和HL7702细胞APOBEC3G蛋白均高表达,转染空质粒pcDNA3.1和未转染的HepG2和HL7702细胞APOBEC3G蛋白低表达或不表达.结论 成功构建了人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G真核表达载体pcDNA3.1-A3G,为进一步研究APOBEC3G抗HBV作用奠定实验基础.
目的 剋隆人載脂蛋白B mRNA編輯酶催化多肽樣3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide 3G,APOBEC3G)基因cDNA,構建APOBEC3G基因的真覈錶達載體,併在體外進行錶達和鑒定.方法 採用RT-PER技術從健康人外週血單箇覈細胞中剋隆APOBEC3G基因,將該基因插入pcDNA3.1真覈錶達載體,構建pcDNA3.1-A3G真覈錶達質粒,併利用脂質體將重組質粒pcDNA3.1-A3G轉染HepG2和HL7702細胞,經免疫細胞化學、Western blot等方法檢測APOBEC3G真覈錶達情況.結果 雙酶切鑒定和測序結果錶明,APOBEC3G真覈錶達載體構建成功.免疫細胞化學和Western blot結果均顯示,轉染pcDNA3.1-A3G的HepG2和HL7702細胞APOBEC3G蛋白均高錶達,轉染空質粒pcDNA3.1和未轉染的HepG2和HL7702細胞APOBEC3G蛋白低錶達或不錶達.結論 成功構建瞭人載脂蛋白B mRNA編輯酶催化多肽樣3G真覈錶達載體pcDNA3.1-A3G,為進一步研究APOBEC3G抗HBV作用奠定實驗基礎.
목적 극륭인재지단백B mRNA편집매최화다태양3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide 3G,APOBEC3G)기인cDNA,구건APOBEC3G기인적진핵표체재체,병재체외진행표체화감정.방법 채용RT-PER기술종건강인외주혈단개핵세포중극륭APOBEC3G기인,장해기인삽입pcDNA3.1진핵표체재체,구건pcDNA3.1-A3G진핵표체질립,병이용지질체장중조질립pcDNA3.1-A3G전염HepG2화HL7702세포,경면역세포화학、Western blot등방법검측APOBEC3G진핵표체정황.결과 쌍매절감정화측서결과표명,APOBEC3G진핵표체재체구건성공.면역세포화학화Western blot결과균현시,전염pcDNA3.1-A3G적HepG2화HL7702세포APOBEC3G단백균고표체,전염공질립pcDNA3.1화미전염적HepG2화HL7702세포APOBEC3G단백저표체혹불표체.결론 성공구건료인재지단백B mRNA편집매최화다태양3G진핵표체재체pcDNA3.1-A3G,위진일보연구APOBEC3G항HBV작용전정실험기출.
