中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2010年
9期
821-824
,共4页
高闪电%常惠芸%独军政%丛国正%邵军军%林彤
高閃電%常惠蕓%獨軍政%叢國正%邵軍軍%林彤
고섬전%상혜예%독군정%총국정%소군군%림동
A型口蹄疫病毒%结构蛋白VP1%原核表达%可溶性%OmpT信号肽
A型口蹄疫病毒%結構蛋白VP1%原覈錶達%可溶性%OmpT信號肽
A형구제역병독%결구단백VP1%원핵표체%가용성%OmpT신호태
目的 可溶性表达A型口蹄疫病毒型特异性结构蛋白VP1,制备型特异性的兔抗A型FMDV VP1多克隆抗体.方法 以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-AVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有OmpT信号肽编码序列的VP1基因编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建可溶性原核表达载体pET-30a-OmpT-AVP1.将该重组质粒转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,以金属离子螯合层析法对可溶性表达的VP1融合蛋白进行纯化,然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA、Western blot和间接免疫荧光法分别对多克隆抗体进行鉴定.结果 SDS-PAGE电泳分析显示pET-30a-OmpT-AVP1重组菌经诱导后表达一Mr 约为33 000的VP1融合蛋白,与预期结果相符.目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带.Western blot 分析结果显示,VP1蛋白可与豚鼠抗A型口蹄疫病毒阳性血清反应.用纯化VP1蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12 800以上,具有较高的型特异性,并且可与同型FMDV细胞培养物中的病毒抗原发生反应.结论 制备了具有高亲和性和特异性的兔抗A型FMDV结构蛋白VP1多克隆抗体,为A型FMDV易感动物的抗体筛查及病原鉴定奠定了基础.
目的 可溶性錶達A型口蹄疫病毒型特異性結構蛋白VP1,製備型特異性的兔抗A型FMDV VP1多剋隆抗體.方法 以A型口蹄疫病毒結構蛋白VP1基因重組剋隆載體pGEM-AVP1為模闆,設計錶達引物,經PCR擴增穫得上遊帶有OmpT信號肽編碼序列的VP1基因編碼區,將其剋隆至該錶達載體pET-30a(+)中,構建可溶性原覈錶達載體pET-30a-OmpT-AVP1.將該重組質粒轉化大腸桿菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,經IPTG誘導錶達,以金屬離子螯閤層析法對可溶性錶達的VP1融閤蛋白進行純化,然後用純化的蛋白免疫新西蘭大耳白兔製備其多剋隆抗體,以ELISA、Western blot和間接免疫熒光法分彆對多剋隆抗體進行鑒定.結果 SDS-PAGE電泳分析顯示pET-30a-OmpT-AVP1重組菌經誘導後錶達一Mr 約為33 000的VP1融閤蛋白,與預期結果相符.目的蛋白純化後,在電泳圖片上顯示較為清晰的單一條帶.Western blot 分析結果顯示,VP1蛋白可與豚鼠抗A型口蹄疫病毒暘性血清反應.用純化VP1蛋白免疫新西蘭大耳白兔製備的多剋隆抗體效價達1∶12 800以上,具有較高的型特異性,併且可與同型FMDV細胞培養物中的病毒抗原髮生反應.結論 製備瞭具有高親和性和特異性的兔抗A型FMDV結構蛋白VP1多剋隆抗體,為A型FMDV易感動物的抗體篩查及病原鑒定奠定瞭基礎.
목적 가용성표체A형구제역병독형특이성결구단백VP1,제비형특이성적토항A형FMDV VP1다극륭항체.방법 이A형구제역병독결구단백VP1기인중조극륭재체pGEM-AVP1위모판,설계표체인물,경PCR확증획득상유대유OmpT신호태편마서렬적VP1기인편마구,장기극륭지해표체재체pET-30a(+)중,구건가용성원핵표체재체pET-30a-OmpT-AVP1.장해중조질립전화대장간균공정균주BL21-(DE3)-plysS,경IPTG유도표체,이금속리자오합층석법대가용성표체적VP1융합단백진행순화,연후용순화적단백면역신서란대이백토제비기다극륭항체,이ELISA、Western blot화간접면역형광법분별대다극륭항체진행감정.결과 SDS-PAGE전영분석현시pET-30a-OmpT-AVP1중조균경유도후표체일Mr 약위33 000적VP1융합단백,여예기결과상부.목적단백순화후,재전영도편상현시교위청석적단일조대.Western blot 분석결과현시,VP1단백가여돈서항A형구제역병독양성혈청반응.용순화VP1단백면역신서란대이백토제비적다극륭항체효개체1∶12 800이상,구유교고적형특이성,병차가여동형FMDV세포배양물중적병독항원발생반응.결론 제비료구유고친화성화특이성적토항A형FMDV결구단백VP1다극륭항체,위A형FMDV역감동물적항체사사급병원감정전정료기출.