生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2011年
6期
17-20
,共4页
朱爱华%夏文静%黄赛男%季卫丹%吕爱军
硃愛華%夏文靜%黃賽男%季衛丹%呂愛軍
주애화%하문정%황새남%계위단%려애군
热休克蛋白60%克隆%大肠杆菌%表达条件
熱休剋蛋白60%剋隆%大腸桿菌%錶達條件
열휴극단백60%극륭%대장간균%표체조건
目的:克隆小鼠热休克蛋白60(HSP60)基因,在大肠杆菌中表达,并进一步对其表达条件进行优化.方法:采用RTPCR技术克隆出非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠HSP60的cDNA序列.构建重组表达载体pET28a- HSP60,以其转化大肠杆菌感受态细胞BL21( DE3),在不同的菌体浓度、不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、不同诱导时间以及不同温度条件下诱导,检测重组蛋白的表达情况.结果:获得一个含有1 721bp的cDNA的片段,重组蛋白HSP60在E.coli BL -21 (DE3)中的最佳表达条件是菌体密度A600nm为0.6,诱导时间为5h,诱导物(IPTG)浓度为4mmol/L,诱导温度为35℃,重组蛋白大小约为60kD.结论:成功克隆了小鼠HSP60基因,并在大肠杆菌中获得高效表达,为重组蛋白的分离纯化及进一步研究其生物学功能奠定了基础.
目的:剋隆小鼠熱休剋蛋白60(HSP60)基因,在大腸桿菌中錶達,併進一步對其錶達條件進行優化.方法:採用RTPCR技術剋隆齣非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠HSP60的cDNA序列.構建重組錶達載體pET28a- HSP60,以其轉化大腸桿菌感受態細胞BL21( DE3),在不同的菌體濃度、不同濃度的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、不同誘導時間以及不同溫度條件下誘導,檢測重組蛋白的錶達情況.結果:穫得一箇含有1 721bp的cDNA的片段,重組蛋白HSP60在E.coli BL -21 (DE3)中的最佳錶達條件是菌體密度A600nm為0.6,誘導時間為5h,誘導物(IPTG)濃度為4mmol/L,誘導溫度為35℃,重組蛋白大小約為60kD.結論:成功剋隆瞭小鼠HSP60基因,併在大腸桿菌中穫得高效錶達,為重組蛋白的分離純化及進一步研究其生物學功能奠定瞭基礎.
목적:극륭소서열휴극단백60(HSP60)기인,재대장간균중표체,병진일보대기표체조건진행우화.방법:채용RTPCR기술극륭출비비반성당뇨병(NOD)소서HSP60적cDNA서렬.구건중조표체재체pET28a- HSP60,이기전화대장간균감수태세포BL21( DE3),재불동적균체농도、불동농도적이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)、불동유도시간이급불동온도조건하유도,검측중조단백적표체정황.결과:획득일개함유1 721bp적cDNA적편단,중조단백HSP60재E.coli BL -21 (DE3)중적최가표체조건시균체밀도A600nm위0.6,유도시간위5h,유도물(IPTG)농도위4mmol/L,유도온도위35℃,중조단백대소약위60kD.결론:성공극륭료소서HSP60기인,병재대장간균중획득고효표체,위중조단백적분리순화급진일보연구기생물학공능전정료기출.
